布鲁氏菌外膜囊泡生物信息学分析及免疫原性评价

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第7期北京时间：

作者：徐朕宇, 徐锦凤, 邓肖玉, 王月丽, 何金科, 谢珊珊, 王震, 易继海, 王勇, 苗玉和, 崔丽瑾, 陈创夫

单位：1. 石河子大学动物科技学院, 石河子 832000;2. 绵羊健康养殖与人兽共患病防控协同创新中心, 石河子 832000;3. 武威职业学院, 武威 733000;4. 新疆第二医学院, 克拉玛依 835000;5. 福建圣维生物科技有限公司, 南平 350000

摘要：【目的】探索布鲁氏菌外膜囊泡（OMVs）在亚单位疫苗上的应用前景，制备布鲁氏菌OMVs亚单位疫苗，评估布鲁氏菌OMVs的免疫原性。【方法】利用高速离心法制备羊种布鲁氏菌OMVs，通过透射电镜、SDS-PAGE和生物信息学分析对制备的OMVs进行形态和组分分析；使用纳米佐剂（LDH）和弗氏佐剂乳化OMVs后免疫小鼠，通过间接ELISA方法检测免疫后7、14、21、28和35 d小鼠血清中的特异性抗体，利用小鼠IgG ELISA检测试剂盒检测免疫后小鼠血清中IgG抗体水平，评估OMVs诱导产生的体液免疫水平；通过小鼠脾脏淋巴细胞分离与细胞因子白细胞介素4（IL-4）和γ-干扰素（IFN-γ）测定及小鼠外周血T淋巴细胞亚群的流式细胞术测定评估OMVs免疫小鼠的细胞免疫水平。【结果】成功提取并纯化了布鲁氏菌OMVs，其直径大小为20~160 nm。生物信息学分析结果显示，OMVs主要组成蛋白OMP25、OMP31、OMP16、OMP19、BP26及SOD均属于亲水性蛋白和抗原性蛋白，且存在多个B细胞和T细胞优势抗原表位。与PBS组相比，OMVs免疫小鼠后，不同佐剂组均可诱导小鼠产生高水平的特异性抗体和IgG抗体（P<0.01）；同时OMVs可显著诱导小鼠脾脏淋巴细胞产生IFN-γ（P<0.05），并促进了CD4+ T细胞的表达（P<0.05）。【结论】本研究证实了羊种布鲁氏菌OMVs具有较强的免疫原性，能诱导小鼠产生强烈的体液免疫和细胞免疫反应，为布鲁氏菌新型亚单位疫苗的开发奠定了理论基础。

关键词：布鲁氏菌;外膜囊泡(OMVs);免疫原性

基金资助：国家自然科学基金项目（32002245、U1803236）；兵团科技计划项目（2017AA003、2021AB012）