非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第7期北京时间：

作者：马天天, 张亚楠, 冯亚文, 岳怀宁, 王亚文, 苏恺, 袁晨, 逯纪成, 孙泰然, 薛文阁, 宋勤叶

单位：1. 河北农业大学动物医学院, 河北省兽医生物技术创新中心, 保定 071000;2. 河北省兽药监察所, 石家庄 050051;3. 河北省保定市动物疫病预防控制中心, 保定 071001;4. 正大集团秦皇岛有限公司, 秦皇岛 066200

摘要：【目的】制备非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV） p30蛋白单克隆抗体，为ASFV检测方法的研究提供重要试验材料。【方法】应用大肠杆菌表达重组ASFV p30蛋白，并用该蛋白免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠，应用细胞融合技术将免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合；通过间接ELISA方法筛选分泌p30蛋白特异性抗体的阳性杂交瘤细胞，腹腔接种小鼠制备腹水抗体；应用ELISA方法鉴定单克隆抗体的类/亚类，通过Western blotting和间接免疫荧光试验（IFA）鉴定单克隆抗体与p30-N端（1―105位氨基酸）和p30-C端（100―194位氨基酸）区域的反应活性；针对抗体识别的p30蛋白区域合成不同肽段，通过ELISA和斑点免疫印迹法鉴定抗体识别的抗原表位。应用间接ELISA方法分析单克隆抗体与ASFV p72蛋白、猪圆环病毒2型（PCV2）衣壳（Cap）蛋白、猪流行性腹泻病毒（PEDV） S蛋白的交叉反应性，以及ASFV抗血清对单克隆抗体抗原结合活性的阻断作用。【结果】获得了2株杂交瘤细胞（C7和G10），其分泌的单克隆抗体（C7和G10）都属于IgG1亚类和κ型（IgG1κ），杂交瘤细胞培养上清和腹水内C7和G10的抗体效价分别为1：1 280、1：640与1：107、1：106；2株抗体均与p30-C端（100―194位氨基酸）区域特异性结合，并识别同一个抗原表位115CTSSFETLFEQEPSSEVPKD134；2株抗体与ASFV p72蛋白、PCV2 Cap蛋白及PEDV S蛋白无交叉反应；ASFV抗血清能有效阻断2株单克隆抗体与p30蛋白结合。【结论】获得2株分泌p30单克隆抗体的杂交瘤细胞株，鉴定了单克隆抗体的抗原识别表位，丰富了p30蛋白的抗原表位信息，为ASFV致病机制的进一步研究提供支撑。

关键词：非洲猪瘟病毒(ASFV);p30蛋白;单克隆抗体;表位

基金资助：河北省重点研发计划项目"非洲猪瘟病原学与血清学快速检测技术的研究及应用"（21326613D）；河北省省属高等学校基本科研业务费研究项目"非洲猪瘟病毒p30抗体检测ELISA方法的建立"（KY2022042）