梓醇抑制Galectin-3和CD146互作改善AGEs致肝窦内皮细胞的损伤作用

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第7期北京时间：

作者：孙伟翔, 宗莹莹, 刘博, 庄远, 秦枫, 陈毓, 朱善元, 许惠琴

单位：1. 江苏农牧科技职业学院, 泰州 225300;2. 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室, 泰州 225300;3. 江苏现代畜牧与新兽药工程技术中心, 泰州 225300;4. 南京中医药大学药学院, 南京 210023;5. 江苏省中药药效与安全性评价重点实验室, 南京 210023;6. 南京中医药大学翰林学院, 泰州 225300

摘要：【目的】探讨梓醇通过影响半乳糖凝集素-3（Galectin-3）和CD146的相互作用改善晚期糖基化终末产物（advanced glycation end products，AGEs）导致大鼠肝窦内皮细胞（rat liver sinusoidal endothelial cells，RLSECs）的炎性损伤作用。【方法】用不同浓度（0、0.1、1、10 μmol/L）梓醇分别孵育RLSECs 48 h后，采用CCK-8法观察细胞增殖情况。用10 μmol/L梓醇孵育RLSECs 0、12、24、48、96 h，同上法观察细胞增殖情况。设Control （空白对照组）、AGEs （AGEs处理）、Cat1（1 μmol/L梓醇）、Cat10（10 μmol/L梓醇）和阳性对照GB1107组（1 μmol/L GB1107），Cat1、Cat10和GB1107组加入相应含量的药物培养基孵育30 min后，除Control组外其他组均在培养基中加入终浓度为200 μg/mL的AGEs刺激，观察以上各组的RLSECs形态变化，采用乳酸脱氢酶（lactate hydrogenase，LDH）法检测细胞的损伤程度，采用ELISA法观察各组单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的分泌量。将巨噬细胞RAW264.7种板，同上法分组并给药，48 h后采用Griess法观察各组一氧化氮（nitric oxide，NO）向细胞上清液的释放量。将RAW264.7细胞种于Transwell小室，RLSECs种于孔板底部，设Control、AGEs、Cat10、Cat10+LV-Galectin-3-GFP、Cat10+LV-Galectin-3-shRNA组，后两组先转染慢病毒48 h，再分别给药30 min后，除Control组外在培养基中加入终浓度为200 μg/mL的AGEs刺激，48 h后用结晶紫法观察巨噬细胞的透膜细胞数量。将Control、AGEs、Cat10、GB1107组的RLSECs孵育药物48 h后，采用免疫荧光法观察Galectin-3和CD146的共定位情况。将Control、AGEs和Cat10组的蛋白样品通过Western blotting和免疫共沉淀（Co-IP）法检测Galectin-3和CD146的相互作用以及各自的表达量。【结果】与Control组相比，Cat0.1组RLSECs增殖率无显著差异（P>0.05），Cat1和Cat10组RLSECs增殖率显著升高（P0.05）。【结论】梓醇通过促进AGEs致Galectin-3和CD146分子复合物的解偶联作用，改善AGEs致肝窦血管内皮细胞的损伤以及促炎因子的释放，降低巨噬细胞的激活和NO的分泌，发挥肝窦血管内皮的保护作用，通过离体试验初步证明了其发挥改善糖尿病AGEs沉积造成的肝损伤的作用机制。

关键词：梓醇;糖尿病肝损伤;晚期糖基化终末产物(AGEs);Galectin-3;CD146;炎性损伤

基金资助：国家自然科学基金项目（81874359）；江苏省高校自然科学基金面上项目（18KJD360002）；江苏农牧科技职业学院科研项目（NSF2021CB04）