抗冷冻蛋白Ⅲ对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞线粒体的影响

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第8期北京时间：

作者：刘可可, 薛梦琦, 唐非台, 杜倩笙, 王欣雨, 董胤余, 王晓丽

单位：广西大学动物科学技术学院, 南宁 530005

摘要：【目的】探索抗冷冻蛋白 Ⅲ(antifreeze protein Ⅲ,AFP Ⅲ)对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞线粒体的保护作用。【方法】以5~8周龄昆明雌性小鼠为试验材料,将收集的小鼠MⅡ期卵母细胞随机分为空白对照组、冷冻对照组(经过玻璃化冷冻-解冻过程)和AFP Ⅲ添加组(在冷冻平衡液及冷冻液中均添加 500 ng/mL AFP Ⅲ),利用线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker green,MTG)检测线粒体分布及含量,JC-1荧光染色检测线粒体膜电位,溶酶体红色荧光探针(Lyso-Tracker red,LTR)检测线粒体与溶酶体共定位,二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平,ATP Assay Kit 检测线粒体ATP含量。【结果】与空白对照组相比,玻璃化冷冻后小鼠卵母细胞的线粒体含量显著降低,部分线粒体呈现异常的散点状分布,且线粒体-溶酶体共定位情况明显增多,线粒体膜电位显著降低(P＜0.05);同冷冻对照组相比,AFP Ⅲ添加组的小鼠卵母细胞线粒体含量显著升高,异常分布的线粒体和线粒体-溶酶体共定位情况减少,线粒体膜电位显著升高(P＜0.05)。与空白对照相比,玻璃化冷冻后小鼠卵母细胞的ROS含量显著升高而ATP含量显著降低(P＜0.05);与冷冻对照组相比,AFP Ⅲ添加组ROS含量显著下降而ATP含量显著升高(P＜0.05)。【结论】AFP Ⅲ 有助于改善玻璃化冷冻小鼠卵母细胞的氧化应激反应,对冻融卵母细胞线粒体具有保护作用。

关键词：抗冷冻蛋白Ⅲ(AFPⅢ);线粒体;卵母细胞;玻璃化冷冻

基金资助：国家自然科学基金资助项目(31460644);广西自然科学基金资助项目(2018GXNSFAA281020)