猪传染性胃肠炎病毒微胶囊疫苗的制备及其免疫效果评价

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第9期北京时间：

作者：秦梓椋, 陈少俊, 何鑫淼, 王文涛, 夏继桥, 冯艳忠, 奈子达, 王超, 刘娣, 姜新鹏

单位：1. 东北农业大学动物科学技术学院, 哈尔滨 150030;2. 黑龙江省农业科学院, 哈尔滨 150086;3. 延边大学农学院, 延吉 133002

摘要：【目的】制备猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)灭活病毒包被的微胶囊,并评价其对新生仔猪口服黏膜免疫效果,以预防TGEV引起严重腹泻和造成经济损失。【方法】采用一步法以海藻酸钠和壳聚糖为微胶囊壁材,以灭活的TGEV为抗原制备TGEV微胶囊疫苗。以包封率、蛋白载量、体外释放速率为微胶囊质量评价指标,分别从成囊材料的配比及不同盐水溶液对微胶囊性能的影响方面对TGEV微胶囊的制备进行筛选,并评价TGEV微胶囊在不同环境的释放速率和室温储存耐受性。最后进行免疫学分析,对仔猪进行口服免疫,测定各项免疫指标,开展抗体效价检测和病毒中和试验。【结果】筛选出的制备微胶囊的最佳工艺条件为:海藻酸钠浓度1.5%,壳聚糖浓度1.2%,氯化钙浓度3.5%,灭活病毒抗原加入量为1~2 mL,在此工艺条件下制备的TGEV微胶囊在PBS和盐水溶液中第3天释放率均超过50%;第18天,释放率分别达到97%和88%。常温放置5个月最低释放率仍保持在80%以上。口服免疫仔猪,微胶囊高、低剂量组粪便样品中IgA抗体的D490 nm值分别为0.97和1.49,IgG的抗体的D490 nm值分别为1.03和1.75。病毒中和试验中,微胶囊高、低剂量组抗体IgG的病毒50%中和效价分别为1∶512和1∶256;微胶囊高、低剂量组抗体IgA的病毒50%中和效价分别为1∶128和1∶64。【结论】海藻酸钠-壳聚糖微胶囊不仅具有在肠道中释放灭活的TGEV抗原的缓释效果,且对于疫苗免疫具有佐剂辅助效果,可增加适应性黏膜免疫应答中的抗体效价,在肠道中释放灭活的TGEV可有效刺激黏膜和全身免疫反应。

关键词：传染性胃肠炎病毒(TGEV);微胶囊;海藻酸钠;壳聚糖;黏膜免疫

基金资助：国家自然科学基金(31902169);黑龙江省优秀青年科学基金项目(YQ2020C008);东北农业大学青年才俊项目(18QC39)