猪圆环病毒4型Rep蛋白原核表达及多克隆抗体制备

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第10期北京时间：

作者：陈如敬, 吴学敏, 陈秋勇, 严山, 吴仁杰, 车勇良, 王隆柏, 周伦江

单位：福建省农业科学院畜牧兽医研究所, 福建省畜禽疫病防治工程中心, 福州 350013

摘要：【目的】应用原核表达系统表达猪圆环病毒4型(Porcine circovirus type 4,PCV4)复制酶蛋白(Rep),纯化后免疫小鼠制备Rep蛋白多克隆抗体。【方法】以PCV4福建株(FJ2020001)为模板,采用PCR法扩增获得Rep基因片段,构建原核表达质粒pET-30a-Rep;将pET-30a-Rep转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用0.5 mmol/L IPTG诱导表达重组Rep蛋白,利用SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白。表达产物经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,利用Western blotting和间接ELISA鉴定鼠源多克隆抗体的免疫原性和抗体效价。【结果】成功克隆PCV4 Rep基因,构建了可表达重组Rep蛋白的原核表达质粒;SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白分子质量约为35 ku,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果表明,该蛋白能被PCV4阳性血清和鼠源多克隆抗体特异性识别,制备的鼠源多克隆抗体效价可达1∶16 000。【结论】本研究成功表达并纯化了具备抗原性的PCV4重组Rep蛋白,为开发PCV4血清学诊断试剂盒和开展猪场PCV4流行病学调查奠定基础。

关键词：猪圆环病毒4型(PCV4);Rep蛋白;原核表达;多克隆抗体

基金资助：福建省公益项目(2021R10260013)；福建省自然科学基金项目(2020J01350)；“5511”协同创新工程项目(026032021533)