添加胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠对牛体外胚胎生产、低温保存及常规冷冻效果的影响

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第10期北京时间：

作者：张浩波, 赵善江, 王欢, 徐茜, 冯志强, 王婉洁, 巩建飞, 庞云渭, 杜卫华, 朱化彬

单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193

摘要：【目的】探究添加胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠(insulin-transferrin-sodium selenite,ITS)对牛体外胚胎生产、4 ℃低温保存及常规程序冷冻效果的影响,以期应用ITS提高牛体外胚胎的生产及保存效果。【方法】对屠宰场卵巢来源的牛卵母细胞进行体外受精,①研究在胚胎体外培养后期液M2中添加ITS对囊胚率的影响,试验分为M2中添加ITS组(M2+ITS)和M2中未添加ITS的对照组(M2-control);②研究在M2中添加ITS后进一步在前期培养液M1中添加ITS对早期胚胎发育的影响,试验分为M1和M2中均添加ITS组(M1+M2+ITS)和仅M2中添加ITS的对照组(M1-control);③在三气培养条件下对ITS改善胚胎发育的效果进行评估,试验分为添加ITS组(ITS)和未添加ITS的对照组(control),以上各组均统计卵裂率、7 d囊胚率及总囊胚率;④将获得的7 d牛囊胚在添加ITS的M2保存液(Hypo-ITS组)中低温保存(4 ℃)24 h后复苏培养,或者在添加ITS(Cryo-ITS组)的冷冻保存液中常规程序冷冻解冻后培养,以低温保存液中未添加ITS(Hypo-control组)和冷冻液中未添加ITS(Cryo-control组)为对照,统计胚胎的存活率和孵化率。【结果】与对照组相比,M2+ITS和M1+M2+ITS组的7 d囊胚率均显著提高(P＜0.05);三气培养条件下,ITS组7 d囊胚率显著提高(P＜0.05)。Hypo-ITS组4 ℃低温保存复苏的牛胚胎存活率与对照组差异不显著(P＞0.05),但孵化率显著高于对照组(P＜0.05);Cryo-ITS组的常规程序冷冻解冻的牛胚胎存活率及孵化率与对照组均无显著差异(P＞0.05)。【结论】ITS可作为添加剂及低温保护剂用于提高牛体外胚胎生产及低温保存效果,但在常规程序化冷冻液中添加ITS对牛体外胚胎常规程序冷冻效果的提升并不明显。

关键词：牛体外胚胎;胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠(ITS);低温保存;常规程序冷冻

基金资助：国家奶牛产业技术体系(CARS-36)；宁夏回族自治区重点研发计划(2021BEF02023)；中国农业科学院科技创新工程(ASTIPIAS06)；甘肃重点研发计划(21YF5NJ196)