基于核酸适配体的金黄色葡萄球菌快速检测试纸条的研制和应用

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第11期北京时间：

作者：李磊, 肖爽, 甄思慧, 王瑜, 武周慧, 王之文, 杜衡, 鲁琳, 王真

单位：北京农学院动物科学技术学院, 北京 102206

摘要：【目的】建立能快速检测金黄色葡萄球菌的胶体金免疫层析法。【方法】制备胶体金并表征，将其与核酸适配体连接后进行表征并喷涂于结合垫，以金黄色葡萄球菌多克隆抗体为检测线、核酸适配体互补序列为质控线制备试纸条，对样品垫与结合垫处理液、样品稀释液、重悬液、T线抗体浓度、适配体连接浓度等试验条件进行优化以获得最佳条件，同时检测试纸条的增敏效果，在最佳条件下对试纸条的灵敏度、特异性进行测试，制备人工污染样品用以评估试纸条在实际样品检测中的效果。【结果】胶体金粒径为20 nm左右，表征结果显示，胶体金与核酸适配体成功连接；试纸条样品垫与结合垫处理液、样品稀释液的最优条件为不同成分的SELEX缓冲液，金标适配体重悬液为HEPES重悬液，T线抗体浓度为2 mg/mL，适配体连接浓度为1 μmol/L；用40 mmol/L羟胺与0.5%氯化金水溶液增敏，检测灵敏度为1×104 CFU/mL，且具有良好的特异性，对于人工污染的肉样和奶样进行检测，灵敏度为1×105 CFU/mL。【结论】本研究成功建立金黄色葡萄球菌试纸条检测方法，且该方法特异性良好，为进一步探讨核酸适配体在病原菌检测中的应用提供了理论依据。

关键词：核酸适配体;胶体金;金黄色葡萄球菌;快速检测

基金资助：北京市优秀人才培养资助项目（2017000026833ZK18）；现代农业产业技术体系北京市创新团队（BAIC08-2023）；北京农学院青年科学基金项目（QNKJ202107）