基于TMT和PRM技术筛选车叶草苷干预CUMS大鼠海马组织的差异表达蛋白

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第11期北京时间：

作者：尹丽, 卢成淑, 曾国芳, 曾诗媛, 吕佳榆, 王华坤

单位：1. 玉林师范学院生物与制药学院, 玉林 537000;2. 玉林师范学院, 地产药用资源开发与生物工程技术中心, 玉林 537000

摘要：【目的】基于蛋白质组学探讨车叶草苷对慢性温和应激（chronic unpredictable mild stress，CUMS）抑郁模型大鼠海马组织的保护作用机制，为车叶草苷的开发利用提供依据。【方法】选取45只雄性SD大鼠预饲1周后，随机分为3组：空白组、模型组、车叶草苷组，每组各15只；空白组每笼饲养3只，其他组单笼饲养。试验周期为5周，于试验第3周开始，温和不可预知性刺激同时给药，车叶草苷组按0.070 g/kg BW剂量灌胃给药，空白组、模型组灌服等体积的生理盐水，每天一次。造模完成后提取大鼠海马组织总蛋白，利用同位素串联质谱标签（tandem mass tags，TMT）定量标记技术进行抑郁模型大鼠海马蛋白质组学分析，筛选潜在差异表达蛋白，借助平行反应监测（parallel reaction monitoring，PRM）技术对候选蛋白在海马组织中的表达情况进行靶向验证。【结果】筛选出车叶草苷组、模型组之间6个上调和17个下调的差异表达蛋白；GO功能和KEGG通路富集分析表明，它们主要参与神经活性配体-受体相互作用、互补和协同调节级联、胃酸分泌等信号通路；PRM成功验证缓激肽（BK）、免疫球蛋白（IGHM及ILD）、蛋白酶体激活剂复合物亚基1（PSME1）4个蛋白表达趋势与TMT定量结果一致，可能是车叶草苷调节抑郁的潜在靶标蛋白。车叶草苷通过参与调控神经活性配体-受体相互作用等信号通路的关键靶标、下调BK蛋白表达对神经元发挥直接或间接的保护作用、上调与免疫球蛋白IgG表达显著相关的PSME1蛋白水平产生免疫抑制、使免疫蛋白浓度趋于正常等途径保护海马组织。【结论】车叶草苷可能通过多途径协同作用减轻机体抑郁症状。本研究结果为深入探索CUMS模型病理机制及阐明车叶草苷调控海马组织的蛋白质或通路提供参考。

关键词：同位素串联质谱标签(TMT);平行反应监测(PRM);车叶草苷;蛋白质组学;海马组织

基金资助：国家自然科学基金项目（81960658）；广西高校中青年教师科研基础能力提升项目（2021KY0584）；玉林师范学院高层次人才科研启动项目（G2018027）；玉林师范学院2019年度校级科研项目（2019YJKY23）