甲磺酸瑞波西汀体外颉颃塞内卡病毒的研究

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第1期北京时间：

作者：巩有权, 周晓翠, 郑辉, 陈峰, 曹振山, 沙洲, 张慧, 崔进, 武瑞, 尼博

单位：1. 黑龙江八一农垦大学动物科技学院, 大庆 163319;2. 中国动物卫生与流行病学中心, 青岛 266032;3. 中国兽药监察所, 北京 100081;4. 山东省动物疫病预防与控制中心, 济南 250100;5. 农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方), 青岛 266032;6. 佳木斯大学, 佳木斯 154000

摘要：【目的】从含有127种化合物的FDA批准上市药物库中筛选具有颉颃A型塞内卡病毒（Senecavirus A，SVA）活性的化合物并研究其作用途径。【方法】利用荧光素酶重组塞内卡病毒（rSVA-NLuc）结合荧光素酶高通量筛选技术，建立抗SVA化合物体外筛选平台。从FDA批准上市药物库中筛选浓度为10 μmol/L时具有抑制荧光素酶活性效应的化合物，并进一步利用实时荧光定量RT-PCR验证其抑制活性，通过反映乳酸脱氢酶（LDH）释放水平的细胞毒性试验进而确定其最大无毒浓度。针对病毒感染周期的吸附、入胞、复制和组装释放等4个主要过程，采用不同的细胞处理方法和实时荧光定量RT-PCR、间接免疫荧光（indirect immunofluorescence assay，IFA）、蛋白免疫印迹（Western blotting）和病毒滴度测定（TCID50）等技术进行化合物分子颉颃机制研究。【结果】从包含127种分子的FDA获批上市药物库中筛选出8种候选抗SVA活性分子，通过实时荧光定量RT-PCR及细胞毒性检测，鉴定出1种安全、有效的化合物——甲磺酸瑞波西汀。在病毒感染细胞36 h内甲磺酸瑞波西汀可使SVA VP3蛋白表达量和病毒滴度均极显著下降（P<0.01）。甲磺酸瑞波西汀处理金黄仓鼠肾细胞（BSR-T7/5）可减少SVA的吸附和入胞；实时荧光定量RT-PCR也显示甲磺酸瑞波西汀能抑制SVA的组装阶段，但它对SVA的复制和释放阶段没有影响。【结论】本试验从FDA批准上市药物库中筛选出了1种细胞毒性较低且颉颃SVA效果优异的化合物——甲磺酸瑞波西汀，该化合物通过抑制SVA的吸附、入胞和组装阶段来对抗SVA感染。本研究为抗SVA药物的进一步研发提供重要参考。

关键词：A型塞内卡病毒(SVA);FDA药物库;高通量筛选

基金资助：“十四五”国家重点研发计划"口蹄疫病毒的分子流行病学与传播机制"（2021YFD1800300）；中国动物卫生与流行病学中心创新基金（DW2021009）