承德无角山羊耳成纤维细胞系的建立与冷冻保存研究

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第1期北京时间：

作者：孙清漪, 李梦奇, 赵炜, 张文涛, 张效生, 张金龙, 张洪军, 房晓欢, 陶晨雨, 夏威, 李俊杰

单位：1. 河北农业大学动物科技学院, 保定 071000;2. 丰宁满族自治县农业农村局, 丰宁 068350;3. 天津市农业科学院畜牧兽医研究所, 天津 300000;4. 围场满族蒙古族自治县农业农村局, 围场 068450;5. 河北省牛羊胚胎技术创新中心, 保定 071000

摘要：【目的】试验以甜菜碱作为冷冻保护剂对承德无角山羊耳成纤维细胞系进行冷冻保存，旨在优化冷冻保护效果，以期在细胞水平上长期保存这一地方品种家畜的遗传资源。【方法】采用组织块培养法建立承德无角山羊耳成纤维细胞系，利用甜菜碱作为冷冻保护剂对其进行玻璃化冷冻，以不同浓度（5%、10%、15%、20%及25%）甜菜碱为试验组，以不同浓度（10%和20%）二甲基亚砜（DMSO）为对照组，对承德无角山羊耳成纤维细胞进行冷冻，复苏后检测细胞的存活率、增殖活力以及细胞中B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）/Bcl-2相关X蛋白（Bax）基因表达量，同时评估甜菜碱的毒性。【结果】本研究建立的承德无角山羊耳成纤维细胞系生长态势良好，细胞纯度较高，细菌、真菌和支原体3类微生物检测结果均为阴性，生长曲线呈S型，达到了建立成纤维细胞系的要求；当甜菜碱浓度为15%时细胞存活率最高，达90.86%，极显著高于对照组（P<0.01），细胞增殖活力及Bcl-2/Bax基因表达量均显著高于对照组（P<0.05），且甜菜碱的毒性远低于传统冷冻保护剂DMSO （P<0.05）。【结论】试验成功以甜菜碱作为单独的冷冻保护剂对承德无角山羊耳成纤维细胞系进行低温冷冻保存，从而保护了承德无角山羊的遗传资源。

关键词：承德无角山羊;成纤维细胞系;冷冻保存;甜菜碱

基金资助：“十四五”国家重点研发计划"北方珍稀濒危牛羊种质资源抢救性保护研究"（2021YFD1200401）