桦褐孔菌提取物对黄曲霉素B1暴露小鼠肝损伤的缓解作用

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第2期北京时间：

作者：赵成铭, 谢为天, 林红英, 胡颍昕, 马文澳, 李颖, 陈志宝

单位：1. 广东海洋大学滨海农业学院, 湛江 524088;2. 国家耐盐碱水稻技术创新中心华南中心, 湛江 524088

摘要：【目的】探究桦褐孔菌提取物(IOE)对黄曲霉毒素B1(AFB1)暴露小鼠肝损伤的保护作用及机制。【方法】选取30只6周龄、体重相近的SPF级雄性C57BL/6小鼠,随机分为5组,对照组连续灌胃蒸馏水10 d;AFB1组第1~7天连续灌胃蒸馏水,第8~10天连续灌胃2 mg/kg AFB1;不同浓度IOE组第1~7天分别连续灌胃25、50和100 mg/kg IOE,第8~10天各组均连续灌胃2 mg/kg AFB1,灌胃剂量均为0.2 mL,每天1次。试验结束后对小鼠称重并采集血液、肝脏组织,统计肝脏指数;通过苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏组织病理变化;利用流式细胞仪分析肝脏细胞凋亡情况。通过细胞毒性试验,筛选AFB1诱导AML12细胞损伤最适条件,并以此建立肝损伤模型,给予不同浓度IOE进行干预,利用CCK-8法测定细胞活力,确定IOE防治AFB1诱导AML12细胞损伤的剂量范围。使用ELISA法检测血清和细胞中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;利用实时荧光定量PCR检测肝脏和AML12细胞中TNF-α、IL-6、IL-1β、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因mRNA表达量;采用Western blotting检测肝脏和AML12细胞中NLRP3、Bax和Bcl-2蛋白表达量。【结果】与对照组相比,AFB1组肝细胞排列紊乱、细胞肿胀,细胞凋亡率极显著升高(P＜0.01);血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量均极显著升高(P＜0.01);肝脏中TNF-α、IL-6、IL-1β、NLRP3和Bax基因表达量均极显著升高,Bcl-2基因表达量极显著降低(P＜0.01);NLRP3和Bax蛋白水平极显著升高,Bcl-2蛋白水平极显著降低(P＜0.01)。与AFB1组相比,不同浓度IOE组小鼠炎性细胞浸润减少,细胞排列整齐,细胞凋亡率极显著降低(P＜0.01);血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量极显著降低(P＜0.01);肝脏TNF-α、IL-6、IL-1β、NLRP3和Bax基因mRNA表达量极显著降低,Bcl-2基因表达量极显著升高(P＜0.01);NLRP3和Bax蛋白水平均极显著降低,Bcl-2蛋白水平极显著升高(P＜0.01)。细胞毒性试验结果显示,AFB1诱导AML12细胞损伤最适条件为10 μg/mL AFB1作用24 h,IOE防治AFB1诱导AML12细胞损伤的浓度梯度为1.5、3、6 μg/mL。体外试验结果显示,AML12细胞中各炎性因子分泌、凋亡相关基因及蛋白表达量变化趋势与体内试验结果均一致。【结论】IOE可通过调节NLRP3、Bax和Bcl-2表达抑制炎性因子分泌,降低细胞凋亡,进而缓解AFB1暴露引起的小鼠肝脏损伤。

关键词：桦褐孔菌提取物(IOE);1(AFB1)')">黄曲霉毒素B1(AFB1);肝脏;凋亡;炎症