免疫共沉淀联合质谱技术筛选蓝舌病病毒NS4蛋白的互作蛋白

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第2期北京时间：

作者：马鲜平, 陈玉娟, 罗世美, 卓晓静, 杨义彬, 刘祎毅, 蔡旭研, 唐艺匀, 陈畅昶, 魏小蓉, 易华山

单位：1. 西南大学动物医学院, 重庆 402460;2. 重庆高鑫生物科技有限公司, 重庆 402460;3. 西南大学医学研究院免疫学研究中心, 重庆 402460

摘要：【目的】筛选蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)NS4蛋白颉颃干扰素(interferon,IFN)信号通路的内源性互作蛋白,以便进一步研究NS4抑制IFN信号转导的作用机制。【方法】在前期仙台病毒(Sendai virus,SeV)诱导IFN信号通路基因表达研究基础上,利用免疫共沉淀方法从转染NS4融合eGFP标签表达载体pcDNA3.1-NS4-eGFP和pcDNA3.1-eGFP空载体的HEK-293T细胞中钓取NS4互作蛋白,对免疫沉淀物进行SDS-PAGE分析,免疫共沉淀洗脱液进行质谱鉴定及生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR检测候选蛋白的编码基因表达特征。【结果】通过免疫共沉淀及质谱鉴定分析和数据库比对,共获得189个差异表达蛋白。生物信息学分析结果显示,候选蛋白主要参与蛋白转录、翻译、病毒感染及免疫调控。亚细胞定位分析结果显示,差异表达蛋白主要定位于细胞核、细胞质以及胞质-胞核,筛选出4个与BTV NS4蛋白存在互作的候选蛋白:多聚嘧啶束结合蛋白1(PTBP1)、细胞周期依赖性蛋白激酶9(CDK9)、N-端豆蔻酰化酶1(NMT1)和Y盒结合蛋白1(YBX1)。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,SeV刺激72 h后,试验组PTBP1、NMT1、YBX1、CDK9基因mRNA表达量均显著或极显著上调(P＜0.05;P＜0.01)。【结论】BTV NS4蛋白颉颃IFN信号通路与PTBP1、NMT1、YBX1、CDK9蛋白表达上调有关,本试验结果为进一步研究BTV NS4蛋白颉颃宿主天然免疫应答的分子机制提供靶标参考。

关键词：蓝舌病病毒(BTV);免疫共沉淀;质谱分析;NS4蛋白