猪源Rab基因shRNA文库与稳定细胞株的构建及其对猪伪狂犬病病毒增殖的影响

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第3期北京时间：

作者：梁东阁, 姚晨, 柴雅静, 蔡梦攀, 褚贝贝, 鲁维飞, 王江, 曾磊, 刘忠虎, 明胜利

单位：1. 河南农业大学动物医学院, 郑州 450046;2. 河南农业大学, 农业农村部动物生化与营养重点开放实验室, 郑州 450046;3. 河南农业大学, 河南省动物生长发育调控重点实验室, 郑州 450046

摘要：【目的】探究Rab家族蛋白在猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)感染宿主细胞中的作用。【方法】以猪肾上皮细胞(PK15)为试验模型,构建Rab基因shRNA文库,并用嘌呤霉素筛选获得稳定的能够抑制猪源Rab基因表达的细胞株。用实时荧光定量PCR检测细胞敲减效率,通过流式细胞术检测敲减Rab基因对PRV增殖的影响;用Western blotting检测PRV-gB蛋白表达量,使用实时荧光定量PCR检测敲减Rab基因后PRV-gB、PRV-TK基因以及相关细胞炎性因子表达量。【结果】试验成功构建包含13种Rab基因敲减细胞系的shRNA文库。流式细胞术检测结果显示敲减Rab基因能显著抑制PRV-GFP增殖(P＜0.05);病毒滴度与Western blotting检测结果表明,敲减Rab基因极显著抑制子代病毒的产生以及PRV-gB蛋白的表达(P＜0.01)。实时荧光定量PCR检测结果显示,敲减Rab基因会显著或极显著抑制PRV-gB、PRV-TK基因表达(P＜0.05;P＜0.01);敲减Rab14和Rab27基因后细胞中IFN-β、ISG15、IL-1β、IL-18基因表达量均显著或极显著升高(P＜0.05;P＜0.01)。【结论】敲减Rab基因能够抑制PRV增殖。研究结果为进一步研究Rab基因在PRV生活周期中发挥的作用奠定基础。

关键词：Rab基因')">Rab基因;猪伪狂犬病病毒(PRV);慢病毒;shRNA文库

基金资助：河南农业大学高层次人才专项支持基金(30501322)