多浪羊PROKR2基因克隆、生物信息学及组织差异表达分析

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第4期北京时间：

作者：黄巧艳, 李伟, 王鑫昆, 邢凤

单位：1. 塔里木大学动物科学学院, 阿拉尔 843300;2. 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室, 阿拉尔 843300

摘要：【目的】克隆多浪羊促动力素受体2(prokineticin receptor 2,PROKR2)基因,并检测初情期启动过程中PROKR2基因在多浪羊不同组织中的表达水平,为探究PROKR2基因在绵羊初情期启动过程中的作用提供依据。【方法】以初情期后多浪羊下丘脑cDNA为模板,PCR扩增PROKR2基因并克隆测序。利用DNAMAN软件对测序结果进行拼接,采用MegAlign软件进行物种间相似性比对并构建系统进化树,并利用生物信息学软件预测多浪羊PROKR2蛋白理化性质和结构功能。使用实时荧光定量PCR技术检测PROKR2基因在多浪羊下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫中初情期前、初情期及初情期后的表达水平。【结果】克隆获得PROKR2基因序列大小为2 641 bp,包括5'-UTR 143 bp、3'-UTR 1 343 bp和CDS区1 155 bp,编码384个氨基酸,与GenBank中绵羊预测mRNA序列(登录号:XM_004014342.5)相似性为99.83%。系统进化树表明,多浪羊PROKR2基因的遗传距离与山羊最近,与鸡最远。生物信息学分析表明,PROKR2蛋白为疏水稳定碱性蛋白,有7个跨膜结构,属于跨膜蛋白,存在31个磷酸化位点,主要在质膜上发挥作用。多浪羊PROKR2蛋白与GnRH1、PROK1、ANOS1等蛋白存在相互作用关系。实时荧光定量PCR结果显示,在多浪羊下丘脑各时期中PROKR2基因表达量均显著高于其他组织(P＜0.05),且在初情期后的表达量最高;垂体中PROKR2基因表达量无显著变化(P＞0.05);子宫中PROKR2基因在初情期前的表达量显著高于初情期和初情期后(P＜0.05);卵巢和输卵管中PROKR2基因在初情期的表达量显著高于初情期前和初情期后(P＜0.05)。【结论】试验成功克隆了多浪羊PROKR2基因CDS区序列,PROKR2蛋白属于疏水稳定碱性蛋白,含有7个跨膜结构,主要在下丘脑中表达,且在卵巢和输卵管中的总趋势为先升后降。研究结果可为进一步探究PROKR2基因在绵羊初情期启动过程中的调控作用提供参考。

关键词：多浪羊;PROKR2基因')">PROKR2基因;克隆;初情期;表达

基金资助：国家自然科学基金(31960655);塔里木大学研究生科研创新项目(TDGRI202243)