miR-455-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞乳脂代谢的影响

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第5期北京时间：

作者：李卫清, 王国栋, 吕丹薇, 张丹丹, 刘权辉, 潘思尧, 黄奔

单位：1. 广西大学, 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室, 南宁 530004;2. 广西大学动物科学技术学院, 南宁 530004;3. 广西医学科学院, 南宁 530016

摘要：【目的】探讨miR-455-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞(CiMECs)乳脂代谢的影响,为研究微小RNA(miRNA)对山羊乳腺功能的调控机制提供理论依据。【方法】利用单一小分子化合物RepSox(TGFβR-1/ALK5抑制剂)诱导山羊成纤维细胞(GEFs),诱导8 d后观察细胞形态变化,采用特异性标记物免疫荧光染色和油红O染色鉴定CiMECs是否诱导成功。使用脂质体将miR-455-3p的过表达载体(miR-455-3p mimics、miR-455-3p mimics-NC)和干扰载体(miR-455-3p inhibitors、miR-455-3p inhibitors-NC)转染至CiMECs,通过细胞增殖及毒性检测(CCK-8)试剂盒、甘油三酯检测试剂盒、实时荧光定量PCR检测miR-455-3p对于CiMECs的增殖率、甘油三酯分泌情况及乳脂代谢基因表达量。【结果】GEFs诱导8 d后形成类似于山羊乳腺上皮细胞的岛状、多核和鹅卵石状细胞形状。免疫荧光结果显示,CiMECs可表达上皮特异性标志物抗原,包括细胞角蛋白14(CK14)和CK18;油红O染色结果显示,诱导后的细胞具有分泌脂滴的功能。CiMECs转染结果显示,miR-455-3p mimics极显著促进了miR-455-3p的表达(P＜0.01),miR-455-3p inhibitors显著抑制了miR-455-3p的表达(P＜0.05)。CCK-8及甘油三酯检测结果表明,与对照组相比,miR-455-3p mimics组细胞增殖率、甘油三酯分泌量均极显著降低(P＜0.01),miR-455-3p inhibitors组细胞增殖率、甘油三酯分泌量均显著增加(P＜0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,诱导后CiMECs中HADHB基因表达量极显著降低(P＜0.01);miR-455-3p mimics组HADHB基因表达量极显著升高(P＜0.01),miR-455-3p inhibitors组HADHB基因表达量显著降低(P＜0.05)。【结论】通过抑制miR-455-3p可促进奶山羊CiMECs增殖,降低脂肪代谢基因HADHB的表达,从而提高山羊奶中脂肪酸含量。研究结果可为后续利用miRNA改善山羊乳品质提供参考。

关键词：奶山羊;化学诱导乳腺上皮细胞(CiMECs);miR-455-3p;乳脂

基金资助：国家自然科学基金(31960160、32160171)