努比亚山羊Rheb基因克隆、生物信息学分析及真核表达载体构建

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第5期北京时间：

作者：邹菊红, 莫智化, 刘雨帆, 邹剑伟, 卢俊, 何海恩, 王璠, 黄艳娜, 蒋钦杨

单位：广西大学动物科学技术学院, 南宁 530000

摘要：【目的】研究旨在对努比亚山羊大脑富集Ras同源物(Ras homolog enriched in brain,Rheb)基因进行克隆和分析,并构建其真核表达载体,为进一步揭示Rheb对努比亚山羊骨骼肌调控的分子机理奠定基础。【方法】试验采用RT-PCR方法从努比亚山羊背最长肌组织中扩增Rheb基因,经琼脂糖凝胶电泳及测序验证正确后进行生物信息学分析,同时构建该基因真核表达载体,转染细胞后进行实时荧光定量PCR检测来验证所构建载体的正确性。【结果】努比亚山羊Rheb基因编码区序列长度为555 bp,编码 184个氨基酸,Rheb蛋白分子式为C910H1456N236O279S6,分子质量为20 359.34 u,原子总数为2 887,理论等电点为5.93。Rheb蛋白属于稳定的亲水性蛋白,不包含跨膜结构域。蛋白二级结构预测结果显示,努比亚山羊Rheb蛋白中α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲分别占40.76%、7.07%、22.83%和29.35%。构建的真核表达载体pcDNA3.1-Rheb转染山羊骨骼肌细胞后,与空载体组相比,Rheb基因表达量极显著升高(P＜0.01)。【结论】本试验成功克隆努比亚山羊Rheb基因编码区序列,并构建pcDNA3.1-Rheb真核表达载体,这为深入理解Rheb基因在努比亚山羊肌肉中的作用提供了理论支持。

关键词：努比亚山羊;Rheb基因')">Rheb基因;生物信息学;骨骼肌细胞;真核表达载体

基金资助：广西研究生教育创新计划项目(YCBZ2023016);国家现代农业产业体系广西牛羊产业创新团队建设项目(nycytxgxcxtd-2021-09)