天然产物库中体外颉颃A型塞内卡病毒化合物的筛选及作用途径研究

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第7期北京时间：

作者：王西彤, 沙洲, 迟田英, 崔进, 郑辉, 陈峰, 曹振山, 张慧, 戈胜强, 魏荣, 尼博, 黄保续

单位：1. 东北农业大学动物医学学院, 哈尔滨 150006;2. 中国动物卫生与流行病学中心, 青岛 266033;3. 青岛市现代生物工程及动物疫病研究重点实验室, 青岛 266032;4. 农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方), 青岛 266032;5. 山东省动物疫病预防与控制中心, 济南 250100;6. 青岛市动物生物安全重点实验室, 青岛 266032

摘要：【目的】寻找对A型塞内卡病毒(SVA)具有抑制活性的天然产物,并深入研究其颉颃途径。【方法】将天然产物浓度统一稀释至10 μmol/L,与荧光素酶重组塞内卡病毒(rSVA-NLuc)相结合,在天然产物小分子库中筛选出具有荧光素酶抑制活性的化合物,采用实时荧光定量RT-PCR方法验证其活性,通过乳酸脱氢酶(LDH)法进行细胞毒性试验确定最大无毒浓度,结合病毒滴度测定、实时荧光定量RT-PCR、Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)等技术,在病毒感染周期的不同阶段,对其颉颃SVA的效果及途径进行研究。【结果】通过初筛,从136种天然产物中筛选出莫能霉素钠盐、孕酮、叶下珠次素、4-羟基德里辛和2-甲基雌酮5种能体外颉颃SVA的化合物。进一步通过实时荧光定量RT-PCR复核验证和细胞毒性检测,筛选出一种能体外颉颃SVA的天然产物——孕酮。与空白对照组相比,其在体外可导致SVA mRNA表达水平极显著下降(P＜0.01),最大无毒浓度达50 μmol/L。进一步研究表明,孕酮能在感染后8、12、24、36 h持续抑制SVA增殖,与对照组相比,在感染后24和36 h病毒滴度显著下降(P＜0.05)。与对照组相比,不同浓度(10、20和50 μmol/L)孕酮在吸附阶段导致SVA吸附水平极显著下降(P＜0.01);在复制阶段使SVA VP3水平显著下降且使病毒滴度极显著下降(P＜0.01);在释放阶段使释放胞外的病毒比例极显著下降(P＜0.01);但对其他途径无显著影响。说明孕酮能在体外抑制SVA吸附、复制和释放,但对其入胞、组装途径无明显作用。【结论】本研究从天然产物小分子库中筛选出一种具有低细胞毒性且对SVA具有较强颉颃作用的天然产物——孕酮。该产物对SVA吸附、复制和释放阶段具有抑制作用,从而颉颃SVA的感染。本研究为促进抗SVA药物的开发和研究SVA的感染偏好性提供了科学参考。

关键词：孕酮;A型塞内卡病毒(SVA);天然产物;颉颃途径

基金资助：“十四五”国家重点研发计划“口蹄疫病毒的分子流行病学与传播机制”(2021YFD1800300);中国动物卫生与流行病学中心创新基金(DW2021009)