1株牛源冠状病毒的分离鉴定及遗传进化分析

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第7期北京时间：

作者：刘文锴, 汪萍, 金映红, 薛晶, 李月, 梁纤纤, 李晓卓, 韩翔舒, 郑启铭, 蒋松, 夏俊

单位：1. 石河子大学动物科技学院, 石河子 832061;2. 新疆畜牧科学院兽医研究所(新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心), 乌鲁木齐 830000;3. 农业农村部草食动物疫病防控重点实验室(省部共建), 乌鲁木齐 830000;4. 新疆动物疫病研究重点实验室, 乌鲁木齐 830000;5. 新疆农业大学动物医学学院, 乌鲁木齐 830000

摘要：【目的】获得新疆地区牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)毒株,探究BCoV体外分离的最佳条件,了解BCoV新疆株的遗传进化情况,为BCoV疫苗候选株提供研究基础。【方法】通过RT-PCR对来自新疆地区7个牛场的腹泻犊牛小肠及其内容物(n=185)进行BCoV检测,将阳性样本经过处理后接种HCT-8细胞,通过间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting和透射电镜对分离的病毒进一步鉴定,通过Reed-Muench法测定分离株的半数组织培养感染剂量(TCID50),将分离毒株进行全基因组测序,并对测序结果进行遗传进化分析。【结果】腹泻样品BCoV检出率为64.9%,接种HCT-8细胞后成功分离到1株BCoV,命名为XJ-SHZ-37(GenBank登录号:OR750853);IFA可观察到孵育病毒的细胞有绿色的特异性荧光,而对照组没有;Western blotting检测结果显示,该分离株与BCoV N蛋白多克隆抗体发生特异性反应;透射电镜可观察到呈皇冠状的病毒颗粒;Reed-Muench法测定分离株的TCID50为10-7.9/0.1 mL;基因组测序及遗传进化结果表明,XJ-SHZ-37与从牛中分离到的冠状病毒科冠状病毒属的BCoV分离株ZJNB2106相似性最高。【结论】新疆地区7个牛场有较高的BCoV检出率,成功分离出1株能稳定遗传且能与BCoV N蛋白多克隆抗体特异性结合的分离株,该分离株有较高的病毒滴度,且通过遗传进化关系表明与中国牛源毒株ZJNB2106株进化亲缘关系最近。

关键词：牛冠状病毒(BCoV);分离鉴定;全基因测序;遗传进化

基金资助：天山英才-青年科技拔尖人才项目(2022TSYCCX0046);自治区重大科技专项——新疆畜禽疫病防控体系质量提升工程(2023A02007)