鸡肠炎沙门菌毒力蛋白SipD生物信息学分析及原核表达

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第7期北京时间：

作者：原亮, 韩晓玺, 巩颖超, 樊夏楠, 郝蓓莉, 郝双双, 李昌文, 常轶聪, 李睿, 刘芳萍

单位：1. 东北农业大学动物医学学院, 哈尔滨 150030;2. 黑龙江省动物疾病防控技术与制剂创制重点实验室, 哈尔滨 150030;3. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所, 哈尔滨 150069

摘要：【目的】预测肠炎沙门菌(Salmonella Enteritidis,SE)SipD蛋白的潜在生物学功能,并表达纯化该蛋白,为探索SipD蛋白作为抗沙门菌纳米抗体的候选抗原提供理论依据。【方法】利用DNAStar软件对GenBank中公布的不同血清型沙门菌株SipD蛋白氨基酸序列进行相似性比对,并通过在线软件对SipD蛋白进行生物信息学分析。根据GenBank中SipD基因序列设计引物,以鸡肠炎沙门菌标准菌株(ATCC 13076)为模板,PCR扩增SipD基因,构建pET-32a(+)-SipD重组质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。应用IPTG诱导重组SipD蛋白的表达,并利用Ni2+亲和层析法纯化。应用SDS-PAGE和Western blotting检测SipD蛋白的表达情况。【结果】SipD蛋白在不同血清型沙门菌之间高度保守;SipD蛋白分子式为C1619H2573N441O540S8,无跨膜区,为膜外蛋白,不存在信号肽,该蛋白的第1~343位氨基酸具有来自超家族侵袭质粒抗原IpaD的保守结构域;SipD蛋白二级结构中α-螺旋、延伸链、β-转角、无规则卷曲占比分别为59.18%、6.41%、3.21%和31.20%;SipD蛋白与B细胞结合的抗原表位有12个。SipD基因长1 029 bp,在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中以可溶性蛋白的形式表达;经纯化、透析、浓缩后蛋白浓度为8.6 mg/mL。SDS-PAGE和Western blotting分析发现,SipD蛋白纯度较高,可用于免疫羊驼制备纳米抗体。【结论】SipD蛋白为膜外蛋白,具有较多抗原结合位点;经表达纯化得到纯度较高的SipD重组蛋白,为进一步制备靶向鸡肠炎沙门菌SipD蛋白的纳米抗体提供材料。

关键词：鸡;肠炎沙门菌;SipD蛋白;生物信息学;原核表达

基金资助：国家重点研发计划项目(2022YFF0710500)