PCYOX1L基因调控LPS诱导的牛子宫内膜上皮细胞的功能研究

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第7期北京时间：

作者：冀国尚, 盛辉, 张俊星, 冯雪, 户春丽, 王雅春, 马燕芬, 李莉, 杨文飞, 马云

单位：1. 宁夏大学动物科技学院, 宁夏回族自治区分子细胞育种重点实验室, 银川 750000;2. 宁夏动物疾病预防控制中心, 银川 750000;3. 宁夏新澳农牧有限公司, 灵武 751400

摘要：【目的】探究异戊二烯基半胱氨酸氧化酶-1样蛋白(prenylcysteine oxidase 1 like protein,PCYOX1L)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的牛子宫内膜上皮细胞(bovine endometrial epithelial cells,BEECs)的炎症、增殖和凋亡的调控作用,以期明确PCYOX1L基因对奶牛子宫内膜炎发生的调控机制。【方法】利用LPS刺激BEECs构建体外炎症模型,设计合成PCYOX1L基因的小干扰RNA(si-PCYOX1L)和过表达质粒载体(pcDNA3.1-PCYOX1L),采用Lipofectamine 3000转染试剂将si-PCYOX1L和pcDNA3.1-PCYOX1L转染至BEECs,通过实时荧光定量PCR检测干扰和过表达PCYOX1L基因对细胞炎症、增殖和凋亡标志基因mRNA表达水平的影响,利用ELISA方法检测白细胞介素-1(IL-1)的蛋白表达水平。利用试剂盒检测BEECs中活性氧(ROS)含量,并采用EdU、CCK-8和流式细胞术检测细胞活力、增殖及周期。利用线粒体膜电位试剂盒检测细胞线粒体损伤,并通过流式细胞术检测细胞凋亡情况。【结果】试验成功构建pcDNA3.1-PCYOX1L过表达载体,并筛选出si-PCYOX1L-385的干扰效果最佳。与对照组相比,干扰PCYOX1L基因后,炎症标志基因(IL-1β、IL-6、IL-8)mRNA表达量极显著下调(P＜0.01),IL-1蛋白含量显著降低(P＜0.05),细胞内ROS水平极显著降低(P＜0.01);增殖标志基因(CDK2、CDK4、PCNA、CCND2)mRNA表达量极显著或显著上调(P＜0.01;P＜0.05),细胞活力上升,促进细胞从S期向G2期的转变;促凋亡基因Bax表达水平显著降低(P＜0.05),抑凋亡基因BCL2表达水平上升,极显著降低了BEECs凋亡率(P＜0.01)。过表达PCYOX1L基因后结果与干扰PCYOX1L基因后结果相反。【结论】PCYOX1L基因促进了BEECs炎症的发生,抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡。本研究结果为进一步探究PCYOX1L基因调控奶牛子宫内膜炎发生的分子机制提供基础数据。

关键词：奶牛;子宫内膜炎;PCYOX1L基因')">PCYOX1L基因;细胞增殖;细胞凋亡

基金资助：现代农业产业技术体系(CARS-36);宁夏回族自治区重点研发计划项目(2022BBF02017、2021BEF01001);中央引导地方科技发展专项(YDZX2022153)