绿原酸对高游离脂肪酸处理犊牛肝细胞胆固醇和胆汁酸代谢的影响

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第7期北京时间：

作者：田艳, 刘佳晨, 王爽, 范文文, 常雅奇, 杨天娇, 张泽鑫, 张冰冰, 徐闯, 杨威

单位：1. 黑龙江八一农垦大学动物科技学院, 大庆 163319;2. 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院, 大庆 163319;3. 中国农业大学动物医学院, 北京 100193

摘要：【目的】探究绿原酸(CGA)对高游离脂肪酸(FFA)处理的犊牛肝细胞胆固醇和胆汁酸代谢的影响。【方法】采用两步胶原酶灌注法分离犊牛原代肝细胞,利用免疫荧光鉴定细胞后将其分为4组,对照组细胞用含2% BSA的RPMI-1640培养基培养;FFA组细胞在含2% BSA的RPMI-1640培养基中添加1.2 mmol/L FFA后培养;CGA组细胞在含2% BSA的RPMI-1640培养基中添加20 μg/mL CGA后培养;CGA＋FFA组细胞在含2% BSA的RPMI-1640培养基中添加1.2 mmol/L FFA和20 μg/mL CGA后培养。培养12 h后收集细胞,通过试剂盒检测细胞中甘油三酯(TAG)和总胆固醇(TC)含量;利用实时荧光定量PCR、Western blotting分别检测肝细胞中胆固醇合成相关因子甾醇调节元件结合转录因子2(SREBF2)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR),胆固醇外排相关因子乙酰辅酶A乙酰转移酶2(ACAT2)、ATP结合盒亚家族A成员1(ABCA1)、ATP结合盒亚家族G成员5(ABCG5)以及胆汁酸代谢相关因子胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)、胆固醇12α-羟化酶(CYP8B1)、胆固醇27α-羟化酶(CYP27A1)、法尼醇X受体(FXR)、成纤维细胞生长因子受体4(FGFR4)等因子的mRNA和蛋白表达水平。【结果】犊牛肝细胞经过不同处理后,与对照组相比,FFA组犊牛肝细胞中TC含量极显著降低(P＜0.01),TAG含量极显著升高(P＜0.01),HMGCR、ABCA1、ABCG5、ABCG8、APOA1、ACAT1、NPC1L1、FXR、FGFR4基因mRNA表达量和SREBF2、ACAT2、ABCA1、ABCG5蛋白表达量均极显著或显著降低(P＜0.01;P＜0.05),CYP8B1基因mRNA表达量和CYP7A1、CYP8B1蛋白表达量均极显著或显著升高(P＜0.01;P＜0.05);CGA组犊牛肝细胞中TC含量极显著升高(P＜0.01),SREBF2、ABCA1、CYP27A1、FXR、FGFR4蛋白表达量均极显著升高(P＜0.01),CYP7A1蛋白表达量极显著降低(P＜0.01)。与FFA组相比,CGA＋FFA组犊牛肝细胞中TC含量显著升高(P＜0.05),TAG含量显著降低(P＜0.05),HMGCR、ACAT2、ABCA1、ABCG5、APOA1基因mRNA表达量和SREBF2、ACAT2、ABCA1、ABCG5、FXR、FGFR4蛋白表达量均极显著或显著升高(P＜0.01;P＜0.05),CYP7A1、CYP8B1蛋白表达量均极显著降低(P＜0.01)。【结论】CGA能参与调节犊牛肝细胞内胆固醇稳态,同时激活FXR和FGFR4,进而缓解高FFA处理的犊牛肝细胞胆汁酸蓄积。

关键词：绿原酸;游离脂肪酸(FFA);犊牛原代肝细胞;胆固醇;胆汁酸

基金资助：黑龙江省自然基金优秀青年项目(YQ2022C029)