金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌对奶牛中性粒细胞炎性因子分泌的影响

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第8期北京时间：

作者：何兴丽, 周佩瑶, 张小雪, 牟泉宙, 李杨, 王昭元, 刘鹏, 王梓, 宋杨阳, 李晓琳, 沈冰蕾

单位：黑龙江八一农垦大学动物科技学院, 大庆 163319

摘要：【目的】探究金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌对奶牛外周血中性粒细胞(PMNs)活力以及炎性因子分泌的影响。【方法】以体外培养的奶牛外周血PMNs为研究对象,用姬姆萨和台盼蓝染色对分离培养的奶牛PMNs进行形态鉴定和细胞活率检测,确定奶牛外周血PMNs的最佳作用时间。构建金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌诱导的奶牛外周血PMNs感染模型,测定奶牛外周血PMNs对两种细菌的杀伤能力;利用CCK-8法测定奶牛PMNs活力,用ELISA法检测细胞中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-8和IL-10含量。【结果】体外分离培养的奶牛外周血PMNs纯度达99%,其存活率随培养时间延长逐渐降低,24 h内存活率达85%以上。金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌对数生长期分别为4~7和4~8 h,二者感染奶牛PMNs后,当MOI为10时,2、4、6 h时金黄色葡萄球菌存活率极显著高于表皮葡萄球菌(P＜0.01)。与对照组相比,金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌感染PMNs不同时间点细胞中TNF-α、IL-8含量均极显著或显著升高(P＜0.01;P＜0.05);感染3、6、12、24 h时细胞中IL-10含量极显著或显著升高(P＜0.01;P<0.05);感染6、9、12、24 h时细胞中IL-1β含量极显著或显著升高(P＜0.01;P＜0.05)。与金黄色葡萄球菌组相比,感染3 h时表皮葡萄球菌组细胞中TNF-α含量极显著降低(P＜0.01),IL-10、IL-8含量极显著或显著升高(P＜0.01;P＜0.05);感染6 h时表皮葡萄球菌组细胞中TNF-α、IL-1β含量极显著降低(P＜0.01);感染9 h时细胞中TNF-α、IL-8含量极显著或显著升高(P＜0.01;P＜0.05)。【结论】金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均能逃避奶牛外周血PMNs的吞噬和杀伤作用,二者感染后细胞活力显著降低,能通过调控PMNs中炎性因子的分泌介导先天免疫应答反应,试验结果为靶向PMNs筛选金黄色葡萄球菌性的奶牛乳房炎抗性相关的候选因子研究奠定基础。

关键词：外周血中性粒细胞;金黄色葡萄球菌;表皮葡萄球菌;炎性因子;奶牛

基金资助：黑龙江省自然科学基金资助项目(LH2022C066);黑龙江省博士后科研启动基金资助项目(IBH-Q21157);黑龙江八一农垦大学研究生创新科研项目(YJSCX2022-Y26)