桑叶多糖对猪肺泡巨噬细胞的免疫调节作用

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第8期北京时间：

作者：韩辰淼, 王靖萱, 杨海峰, 陈晓兰, 卜仕金

单位：1. 江苏农牧科技职业学院, 泰州 225300;2. 扬州大学兽医学院, 扬州 225009;3. 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

摘要：【目的】探究桑叶多糖(mulberry leaf polysaccharide,MLP)对猪肺泡巨噬细胞免疫功能的影响及其作用机制。【方法】以猪肺泡巨噬细胞为研究对象,通过CCK-8方法检测不同浓度MLP作用后猪肺泡巨噬细胞的增殖率,筛选MLP的适宜作用浓度。将细胞分成空白对照组(BC组)、阳性对照组(LPS组)和不同浓度MLP组,通过Griess法检测猪肺泡巨噬细胞中一氧化氮(NO)释放量;利用中性红吞噬试验检测猪肺泡巨噬细胞吞噬能力;使用ELISA法测定猪肺泡巨噬细胞中白细胞介素-10(IL-10)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;利用实时荧光定量PCR检测TNF-α、Toll样受体4(TLR4)、IL-6、IL-10以及核转录因子κB(NF-κB)的mRNA表达量;通过Western blotting检测猪肺泡巨噬细胞中TLR4和p65蛋白表达量。【结果】与0 μg/mL MLP组相比,MLP浓度为20、40和80 μg/mL时猪肺泡巨噬细胞增殖率极显著升高(P＜0.01),且呈剂量依赖性,后续选择20、40和80 μg/mL MLP进行试验。与BC组相比,不同浓度MLP组猪肺泡巨噬细胞吞噬率和NO释放量极显著升高(P＜0.01)。ELISA检测结果显示,MLP浓度为80 μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中IL-6和TNF-α含量显著或极显著高于BC组(P＜0.05;P＜0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,MLP浓度为40和80 μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中TNF-α、IL-6和TLR4基因mRNA表达量均极显著高于BC组(P＜0.01)。Western blotting检测结果显示,MLP浓度为80 μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中p65和TLR4蛋白表达量极显著高于BC组(P＜0.01)。【结论】MLP能激活猪肺泡巨噬细胞,显著促进NO的释放以及IL-6、TNF-α的分泌,具有良好的免疫调节活性,其免疫调节机制与巨噬细胞表面TLR4的激活相关。

关键词：桑叶多糖;猪肺泡巨噬细胞;免疫调节;细胞因子

基金资助：泰州市科技支撑(农业)项目(TN202218);江苏高校优势学科建设工程资助项目;江苏省职业院校学生创新创业培育计划项目(G-2023-0726);江苏农牧科技职业学院农牧产业核心技术创新项目(NSF2022ZR05)