过表达miRNA-424-5p靶向AKT3对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡的影响

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第8期北京时间：

作者：姚伟佳, 罗春海, 刘佳金, 王薇, 李丹阳, 刘炳琦, 付世新

单位：黑龙江八一农垦大学动物科技学院, 大庆 163319

摘要：【目的】本试验通过过表达miRNA-424-5p,明确miRNA-424-5p与其靶基因丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT serine/threonine kinase 3,AKT3)对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡影响的机制,为阐明miRNA-424-5p在奶牛胎盘分离过程中的作用机制提供试验基础和理论依据。【方法】试验分为3组:空白对照组(Control)、阴性对照组(miRNA-424-5p mimics NC)和过表达组(miRNA-424-5p mimics)。采用茎环法实时荧光定量PCR检测转染miRNA-424-5p mimics后奶牛子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p的表达变化;采用Western blotting及实时荧光定量PCR检测过表达后AKT3和凋亡相关因子的表达变化,采用Annexin V-FITC/PI法检测奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡情况。【结果】与空白对照及阴性对照组相比,转染miRNA-424-5p mimics后子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p mRNA的表达量极显著升高(P＜0.01),B淋巴细胞瘤-2 (B-cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase3)和Caspase9的mRNA表达量极显著升高(P＜0.01),AKT3和Bcl-2的mRNA表达量极显著降低(P＜0.01);Bax和Caspase3蛋白表达量极显著升高(P＜0.01),Caspase9蛋白表达量显著升高(P＜0.05),AKT3和Bcl-2 蛋白表达量极显著降低(P＜0.01);细胞凋亡率极显著升高(P＜0.01)。【结论】过表达miRNA-424-5p可通过靶向调控AKT3使奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡因子Bax、Caspase3和Caspase9的表达量增加,使Bcl-2的表达量降低,进而促进细胞凋亡。

关键词：奶牛;miRNA-424-5p;AKT3;子宫内膜上皮细胞;凋亡

基金资助：黑龙江省自然科学基金(LH2021C073)