脂多糖与钙离子共处理的牛乳腺上皮细胞miRNA表达谱的比较分析

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第9期北京时间：

作者：许浩天, 于月通, 李静, 马志远, 杨彬, 王泽坤, 陀海欣, 齐萌

单位：塔里木大学动物科学与技术学院, 新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室, 阿拉尔 843300

摘要：【目的】 探索钙离子对牛乳腺上皮细胞炎症反应的调控作用，比较分析脂多糖与钙离子共处理的牛乳腺上皮细胞的miRNA表达谱。【方法】 使用脂多糖处理牛乳腺上皮细胞构建炎症反应模型，检测不同浓度(0.5～6.6 mmol/L)钙离子和脂多糖(50 μg/mL)共处理的牛乳腺上皮细胞的炎症因子转录水平。提取正常、脂多糖处理、脂多糖与钙离子共处理牛乳腺上皮细胞样本中总RNA，每组各3个样本。对9个RNA样本进行质量评估，并对其开展miRNA测序和生物信息学分析，最后对3组共有差异表达miRNA进行实时荧光定量PCR验证。【结果】 在牛乳腺上皮细胞炎症模型中，高浓度钙离子可抑制炎症因子的转录。9个样本的clean reads在raw reads中占比为93.86%～98.18%，序列分布长度均集中在21～24 nt之间。3组样本的组内相似性高，而组间差异度高。3组样本共鉴定出47个差异表达miRNA，共有差异表达miRNA分别为bta-miR-11980、bta-miR-1246和bta-miR-677。GO功能和KEGG通路富集分析显示，差异表达miRNA的靶基因显著富集于细胞通讯调节、信号调节、内膜系统、系统发育、细胞发育过程、细胞分化等GO条目，显著富集于HIF-1信号通路、ErbB信号通路、TNF信号通路、突触囊泡周期、肌醇磷酸代谢途径等通路。实时荧光定量PCR验证结果显示，3组样本共有差异表达miRNA(bta-miR-677和bta-miR-1246)表达趋势与转录组测序结果一致。【结论】 钙离子通过调控牛乳腺上皮细胞内bta-miR-11980、bta-miR-1246和bta-miR-677等差异表达miRNA的表达模式，间接影响牛乳腺上皮细胞炎症反应进程。

关键词：脂多糖;钙离子;牛乳腺上皮细胞;miRNA表达谱

基金资助：新疆生产建设兵团指导性科技计划项目(2022ZD142);塔里木大学校长基金硕士项目(TDZKSS202219)