1株进口胎牛血清源牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定及小鼠致病性分析

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第9期北京时间：

作者：刘照, 董倩倩, 吴澳迪, 王凯月, 梁成哲, Adnan Ali, 盛金良

单位：石河子大学动物科技学院, 石河子 832000

摘要：【目的】 对进口胎牛血清中的牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)进行分离鉴定和遗传进化分析。【方法】 通过 RT-PCR方法检测到实验室购买的某进口胎牛血清中存在BVDV核酸污染，将污染血清接种MDBK细胞，传代培养至第7代，对每一代细胞的培养物进行BVDV 5'-UTR扩增，PCR扩增产物连接pMD19-T载体并测序,对测序结果进行遗传进化分析；利用间接免疫荧光试验(IFA)进行分离株抗原检测和病毒滴度测定；将分离株接种BALB/c小鼠，采集眼眶血进行血常规检测和RT-PCR检测。【结果】 该病毒分离株在培养MDBK细胞时未能引起细胞病变效应，细胞培养物 RT-PCR扩增为阳性；基于5'-UTR序列的相似性分析表明，该分离株与BVDV UDEC-COY7-17(OL860952.1)毒株5'-UTR序列相似性为99.6%，同属BVDV-1e亚型；IFA检测到感染分离株的MDBK细胞细胞质中出现特异性绿色荧光信号，而对照组无信号；半数培养感染剂量(50% tissue culture infectivedose,TCID50)为10-4.7/0.1 mL；接种BALB/c小鼠后第7天血常规检测其血液中白细胞(WBC)和淋巴细胞(LYM)数量极显著低于对照组(P＜0.01)。提取血液总 RNA 进行5'-UTR RT-PCR检测，检测结果为阳性，扩增产物大小为298 bp，与预期相符。【结论】 本研究在进口胎牛血清中分离得到1株非致细胞病变型BVDV-1e亚型毒株，证明进口胎牛血清中存在BVDV抗原污染，为进一步研究BVDV的相关分子机制提供试验材料。

关键词：牛病毒性腹泻病毒(BVDV);胎牛血清;分离;鉴定;致病性

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