嗜吞噬细胞无浆体MSP4蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第9期北京时间：

作者：崔艳艳, 王冠, 郝俊芳, 李志强, 余复昌, 史柯, 席丽, 齐萌

单位：1. 商丘师范学院生物与食品学院, 商丘 476000;2. 塔里木大学动物科学与技术学院, 阿拉尔 843300;3. 新乡学院医学院, 新乡 453003

摘要：【目的】 利用原核表达系统表达嗜吞噬细胞无浆体(Anaplasma phagocytophilum，AP) MSP4蛋白，并制备抗MSP4蛋白的多克隆抗体，为嗜吞噬细胞无浆体检测方法的建立提供试验材料和理论依据。【方法】 根据GenBank公布的MSP4基因优化并合成MSP4基因，将其插入pET-30a载体，构建pET-30a-MSP4重组质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，对影响表达效果的因素(温度和IPTG)进行优化，选择最佳诱导表达条件，经SDS-PAGE分析蛋白表达情况，重组蛋白经Ni-IDA亲和层析纯化，并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。用纯化后的重组蛋白MSP4免疫新西兰大白兔制备兔源多克隆抗体，利用间接 ELISA和Western blotting检测多克隆抗体效价及特异性。【结果】 本研究成功构建pET-30a-MSP4重组质粒，在37 ℃、0.8 mmol/L IPTG诱导条件下蛋白表达量较高，表达的重组蛋白分子质量约为28 ku，以包涵体形式存在。Western blotting鉴定结果显示，其免疫原性较好。获得的多克隆抗体效价分别为1∶64 000(家兔1)和1∶128 000(家兔2)，且能与表达的重组蛋白MSP4发生特异性反应，具有较好的免疫原性。【结论】 本研究成功表达纯化了嗜吞噬细胞无浆体MSP4蛋白,并制备了其多克隆抗体，可为嗜吞噬细胞无浆体抗原抗体检测方法的建立及疫苗效果评估提供参考，也为MSP4蛋白功能研究奠定基础。

关键词：嗜吞噬无浆体;MSP4蛋白;原核表达;多克隆抗体

基金资助：国家自然科学基金(32102708);河南省科技攻关计划项目(222102110422)