H9N2亚型禽流感病毒感染鸡呼吸道应答模式研究

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第9期北京时间：

作者：池周颖, 李天旭, 吴亚鑫, 瞿孝云, 李思婕, 孙敏华, 张建峰, 廖明, 杜寿文

单位：1. 华南农业大学兽医学院, 人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室, 广州 510642;2. 广东省农业科学院动物卫生研究所, 广东省畜禽疫病防治研究重点实验室, 农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室, 广州 510640;3. 仲恺农业工程学院, 广州 510550

摘要：【目的】 通过建立H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡上呼吸道炎症模型，探索其感染鸡上呼吸道引起的炎症反应。【方法】 将H9N2亚型AIV流行毒株GD10142，按照100 μL/只(108 EID50/100 μL)的剂量通过滴鼻点眼方法感染SPF鸡，并在感染后观察鸡的临床特征，采集感染后0、1、3、5、7、9 d的咽拭子和血清样品；感染后5和9 d剖检观察鸡的呼吸道和肺脏病理变化，收集气管灌洗液、气管和肺脏组织；通过实时荧光定量PCR检测咽拭子、气管灌洗液、气管和肺脏组织中的病毒载量；应用ELISA方法检测感染后血清总IgG和H9N2亚型AIV特异性IgG的变化规律，通过血清中和试验分析血清中和抗体的活性；通过ELISA方法检测血清和气管灌洗液中炎症相关细胞因子白细胞介素6(IL-6)、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和核转录因子κB(NF-κB)的水平。【结果】 H9N2亚型AIV感染后鸡没有出现典型的临床特征，但感染后1～5 d在咽拭子中可检测到病毒核酸，且感染3 d后病毒载量最高，感染5 d后检测不到病毒核酸；感染5 d时，在气管灌洗液、气管和肺脏检测到病毒核酸，其中前两者载量高于肺脏；血清总IgG和H9N2亚型AIV特异性IgG在感染后3 d增多，感染后5～9 d维持较高水平，且具有较强的病毒中和活性；血清IL-10、IL-1β、TNF-α和NF-κB也在感染后3 d开始呈上升趋势；但气管灌洗液中IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α和NF-κB含量很低，且感染前后无明显变化。【结论】 本研究成功建立了H9N2亚型AIV感染鸡呼吸道模型，确定上呼吸道是H9N2亚型AIV主要感染和增殖部位，H9N2亚型AIV感染诱导机体产生促炎和抑炎细胞因子，可能是感染动物维持免疫稳态的重要因素。本研究为深入探索H9N2亚型AIV的致病机制和宿主防御机制奠定了基础。

关键词：H9N2亚型禽流感病毒;呼吸道感染;免疫应答;模型评价

基金资助：广东省科技计划项目(2021B1212030015);国家重点研发计划(2022YFD1801000);“十四五”广东省农业科技创新十大主攻方向“揭榜挂帅”项目(2022SDZG02);广东省畜禽疫病防治研究重点实验室项目(2023B1212060040)