谷氨酸脱氢酶gdhA基因缺失对单增李斯特菌抗氧化应激的影响

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第9期北京时间：

作者：田篮鑫, 杨雨婷, 秦祎, 张政, 田光明, 方春

单位：长江大学动物科学技术学院, 荆州 434025

摘要：【目的】 旨在阐明谷氨酸脱氢酶gdhA基因对单增李斯特菌抗氧化应激能力的影响，并探明glnR基因对gdhA基因的调控作用。【方法】 采用同源重组技术构建单增李斯特菌gdhA基因缺失株；通过生长曲线测定亲本株10403S、缺失株10403S-ΔgdhA和回补株10403S-CΔgdhA菌株的生长能力；利用抗氧化应激存活试验检测gdhA基因缺失对单增李斯特菌抗氧化应激能力的影响。诱导GdhA蛋白表达并纯化，制备兔多克隆抗体，并通过Western blotting检测抗体特异性。通过构建携带gdhA基因启动子区域的GFP报告质粒，测定氧化应激条件下glnR基因缺失对gdhA基因转录水平的影响。使用Western blotting检测氧化应激条件下glnR基因缺失对GdhA蛋白表达水平的影响，并检测glnR基因缺失对菌株存活能力的影响。【结果】 生长曲线结果显示，gdhA基因缺失不影响单增李斯特菌在正常条件下的生长能力。在20 mmol/L H2O2条件下，缺失株10403S-ΔgdhA存活能力极显著高于亲本株10403S(P＜0.01)。Western blotting结果显示，GdhA兔多克隆抗体制备成功。GFP荧光分析结果显示，glnR基因缺失后，gdhA基因转录水平极显著上调(P＜0.01)；在氧化应激条件下glnR基因缺失后GdhA蛋白表达水平极显著升高(P＜0.01)；glnR基因缺失菌株存活能力显著下降(P＜0.05)。【结论】 谷氨酸脱氢酶编码基因gdhA缺失不影响单增李斯特菌10403S正常生长，但显著提高其氧化应激条件下的存活能力，gdhA基因转录水平及GdhA蛋白表达水平受glnR基因负调控。

关键词：单增李斯特菌;谷氨酸脱氢酶;gdhA基因')">gdhA基因;氧化应激;glnR基因')">glnR基因

基金资助：湖北省教育厅科学技术研究项目(Q20221302);湖北省第四批现代农业产业技术体系禽蛋产业技术体系项目(2023HBSTX4-04)