猪流行性腹泻病毒N蛋白原核表达及多克隆抗体制备

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第10期北京时间：

作者：吴婕, 杜菁, 樊繁, 任金阳, 卢会鹏, 张力, 雷昕诺, 曹世诺, 吴植, 朱睿, 朱善元

单位：1. 江苏农牧科技职业学院, 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室, 江苏现代畜牧与新兽药工程技术中心, 泰州 225300;2. 江苏农牧科技职业学院, 泰州 225300

摘要：【目的】 利用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)核衣壳蛋白(N)，并制备具有高效价和特异性强的多克隆抗体。【方法】 利用生物信息学工具分析PEDV N蛋白氨基酸序列，并预测其抗原性；利用原核表达载体pColdⅠ诱导表达重组N蛋白，并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白；使用兔多抗制备佐剂与纯化后的重组N蛋白混合后免疫新西兰白兔，收集血清制备多克隆抗体。利用间接ELISA法测定重组N蛋白多克隆抗体效价，并对多克隆抗体进行Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)验证。【结果】 生物信息学预测结果显示，N蛋白不含信号肽和跨膜结构，具有良好的抗原性和溶解度。SDS-PAGE电泳结果显示，重组N蛋白大小约为58 ku，主要以可溶性蛋白存在；Western blotting结果显示，该蛋白能与抗His标签的鼠源单克隆抗体发生特异性反应。间接ELISA结果显示，多克隆抗体效价可达1∶204 800；Western blotting结果表明，抗体稀释度为1∶5 000时能特异性识别重组N蛋白及PEDV感染后的Vero细胞样品中的N蛋白；IFA结果显示，当稀释度为1∶1 000时，该抗体能有效识别PEDV感染细胞样品中的N蛋白。【结论】 本研究成功制备了效价高和特异性好的兔抗N蛋白多克隆抗体，为深入研究PEDV N蛋白的功能、了解PEDV复制机制和病毒-宿主细胞间的互作提供试验材料，为开发PEDV诊断和检测方法奠定基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV);N蛋白;原核表达;多克隆抗体

基金资助：西藏自治区科技重大专项项目(XZ202101ZD0005N)；江苏农牧科技职业学院校级科研项目(NSF2022CB15)；江苏农牧科技职业学院科技创新团队项目(NSF2023TC01)