抗鸡早幼粒细胞白血病蛋白单克隆抗体的制备及其在荧光检测中的应用

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第10期北京时间：

作者：曹梦瑶, 王晶, 周林宜, 程晶, 李永清, 许健, 江波, 胡格

单位：1. 北京农学院动物科学技术学院, 北京 102206;2. 北京市农林科学院畜牧兽医研究所, 北京 100097;3. 中国农业 大学动物医学院, 北京 100193;4. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 兰州 730070

摘要：【目的】 探究鸡早幼粒细胞白血病蛋白核小体(PML NBs)在马立克病病毒(Marek’s disease virus，MDV)感染过程中的生物学功能，制备抗鸡早幼粒细胞白血病蛋白(Ch-PML)单克隆抗体，建立可视化检测Ch-PML的方法。【方法】 通过原核表达系统制备Ch-PML重组蛋白，并将其作为免疫原免疫BALB/c小鼠，采用细胞融合技术将骨髓瘤细胞和免疫小鼠的脾细胞进行融合，用ELISA方法筛选出分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株，通过体内诱生法制备腹水并用Protein A/G纯化抗Ch-PML单克隆抗体，利用Western blotting和ELISA方法检测单克隆抗体的特异性、亲和力和亚类，最后利用该单克隆抗体建立用于鸡PML NBs的间接免疫荧光试验(IFA)检测方法。【结果】 Ch-PML蛋白在大肠杆菌中可溶性表达，分子质量大小为19 ku；以此蛋白成功制备了1株抗Ch-PML单克隆抗体，该抗体具有良好的特异性和高亲和力，经亚类和型检测，其为IgG2b亚类，轻链为Kappa型。利用制备的抗Ch-PML单克隆抗体建立的IFA检测方法发现，内源性PML NBs在宿主细胞核中呈点状分布，过表达的Ch-PML在宿主细胞核中形成团块状聚集体，且MDV感染宿主细胞后核内PML NBs数量比未感染细胞显著减少(P＜0.05)，说明MDV感染导致核内的PML NBs组装受到抑制。【结论】 本研究利用制备的抗Ch-PML单克隆抗体建立了鸡PML NBs的IFA检测方法，并发现MDV抑制宿主细胞PML NBs组装这一现象，为MDV致病机制的解析提供了新的研究思路和工具。

关键词：早幼粒细胞白血病蛋白(PML);单克隆抗体;核小体(NBs);马立克病病毒(MDV)

基金资助：国家自然科学基金青年基金项目(31902245)；北京市农林科学院科技创新能力建设专项(KJCX20220422)；北京市农林科学院畜牧兽医研究所改革与发展项目(XMS202403)