山东地区1株牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定及遗传进化分析

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第10期北京时间：

作者：毕峻铭, 董雅琴, 崔进, 沙洲, 顾丛丛, 郑辉, 魏荣, 孙福亮, 张锋, 张志宏

单位：1. 延边大学农学院, 延吉 136200;2. 中国动物卫生与流行病学中心, 青岛 266032;3. 农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方), 青岛 266032;4. 桓台县畜牧渔业服务中心, 淄博 256400,;5. 陵城区临齐街道农业综合服务中心, 德州 253500

摘要：【目的】 了解并掌握山东地区牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)流行毒株的生物学特性和遗传变异情况，为BVDV防控提供理论依据和技术支持。【方法】 采集养牛场疑似BVDV感染样品制备组织上清液，利用RT-PCR方法进行病原鉴定，接种MDBK细胞进行病毒分离培养，采用间接免疫荧光试验(IFA)和电镜观察对分离毒株进行鉴定，对分离毒株全基因组进行分段扩增、克隆和测序，并采用Lasergene等软件分别对全基因组序列、Npro和E2基因进行比对和遗传演化分析。【结果】 病料样品BVDV特异性引物RT-PCR扩增得到大小约504 bp的目的条带，与预期大小一致。IFA结果显示特异性绿色荧光；电镜下可见直径约50 nm的病毒粒子，表明分离到1株非致细胞病变型BVDV毒株，命名为SDNF9株。分离株基因组全长为12 232 nt，与BVDV参考毒株的全基因组核苷酸相似性为79.1%～93.8%，其中，与中国分离毒株22AH-1和澳大利亚毒株Bega-like的相似性最高，为93.8%；Npro和E2蛋白氨基酸存在多个位点变异；SDNF9分离毒株与BVDV2型毒株和BVDV3型毒株处于遗传演化的不同分支，而与BVDV 1型毒株处于同一分支，属于BVDV 1c基因型。【结论】 本研究成功分离到1株BVDV 1c流行毒株，并进行基因组和遗传演化分析，与中国分离毒株22AH-1亲缘关系最近，为山东地区牛病毒性腹泻的防控和疫苗研制提供数据和材料支持。

关键词：牛病毒性腹泻病毒(BVDV);分离;鉴定;序列分析;遗传进化分析

基金资助：“十四五”国家重点研发计划(2021YFD180030)