基于牛流行热病毒G蛋白的免疫胶体金检测方法的建立

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第10期北京时间：

作者：王雪妍, 靳双媛, 杜家伟, 温宏武, 李永琴, 许立华

单位：1. 宁夏大学动物科技学院, 银川 750021;2. 宁夏吴忠市盐池县农业农村局畜牧技术推广服务中心, 盐池 751500

摘要：【目的】 建立牛流行热病毒(Bovine ephemeral fever virus，BEFV)的免疫胶体金检测方法，为牛流行热(BEF)诊断提供研究基础。【方法】 构建原核表达载体pET32a-BEFV-G，将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行表达，对诱导成功后的表达产物进行纯化和SDS-PAGE、Western blotting鉴定。以纯化后的蛋白作为特异性抗原包被检测线，以链球菌G蛋白作为金标抗原，与金纳米颗粒结合后标记在金标垫上，用羊抗鼠IgG作为质控线，通过优化不同的反应条件，建立检测BEFV的免疫胶体金检测方法，并对试纸条进行敏感性、特异性和重复性检测。【结果】 SDS-PAGE结果显示，在IPTG终浓度为0.75 mmol/L时，37 ℃诱导8 h的条件下重组BEFV G蛋白表达量最大，且以包涵体形式表达，分子质量约为46 ku。Western blotting结果显示，浓缩纯化后的重组BEFV G蛋白具有较好的反应原性，可作为包被抗原用于免疫胶体金试纸条的建立。在质控线包被的抗体羊抗鼠IgG浓度为2 mg/mL，BEFV G蛋白包被浓度为0.6 mg/mL，喷金量为2.5 μL/cm的条件下，3～5 min就可完成检测。制备的试纸条有较高的敏感性和特异性，血清稀释倍数为40倍的时候显色接近消线，且试纸条仅与BEFV阳性血清发生显色反应，与牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)等其他病毒阳性血清均无交叉反应，阳性血清样本重复性试验证明试纸条的重复性较高，成功建立了免疫胶体金检测方法。【结论】 本研究以原核表达的G蛋白为抗原成功制备了检测BEFV的新型免疫胶体金试纸条，该检测试纸条特异性强、稳定性好，适合用于临床快速检测BEF。

关键词：牛流行热病毒(BEFV);G蛋白;原核表达;蛋白纯化;免疫胶体金

基金资助：宁夏奶牛育种专项“优质高产奶牛安全健康养殖技术研究与示范”(2019NYYZ0503)；宁夏动物疫病净化科技创新团队项目(2020CXTDLX05)