柔嫩艾美耳球虫莫能菌素耐药株筛选及其与敏感株基因组SNP密度分布差异分析

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第11期北京时间：

作者：顾小龙, 薛毅, 方素芳, 班成怿, 施宇博, 杨舰航, 杜芳辰, 齐珍珍, 崔平

单位：河北北方学院动物科技学院, 张家口 075131

摘要：【目的】 明确莫能菌素耐药虫株与敏感虫株在基因水平的差异，进而解析莫能菌素耐药性产生的分子机制。【方法】 通过模拟田间感染的方式诱导柔嫩艾美耳球虫对莫能菌素的耐药性。第1次诱导试验，将 400 只 14 日龄无球虫鸡平均分为2组，分别为Ⅰ组(接种不加药组)和Ⅱ组(莫能菌素推荐剂量组),按照100 mg/kg 在基础饲粮中添加莫能菌素。从Ⅰ组中随机选择 10 只鸡，接种对莫能菌素敏感的柔嫩艾美耳球虫豪顿株，剂量为5 000卵囊/鸡。自接种后 8 d开始，将Ⅰ组新鲜粪便抛洒到Ⅱ组垫料上模拟球虫田间感染，连续抛洒17 d。接种后33 d，随机剖检Ⅱ组10只鸡，收集盲肠内卵囊。第2次诱导试验，将100只14日龄无球虫鸡作为Ⅲ组(莫能菌素高剂量组)，按照133 mg/kg在饲料中添加莫能菌素，随机选择10只鸡接种收集的卵囊，剂量为 5 000 卵囊/鸡。接种后17 d，莫能菌素添加量提高至400 mg/kg。接种后27 d，收集盲肠卵囊。以抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和最适抗球虫活性百分率(POAA)四项指标综合判定诱导株的耐药性。提取耐药株或敏感株孢子化卵囊基因组并进行基因组重测序，通过单核苷酸多态性(SNP)密度分布解析耐药株与敏感株之间的差异。【结果】 第1次诱导试验，接种后33 d获得耐100 mg/kg莫能菌素的卵囊(1×莫能菌素诱导株)。第2次诱导试验,接种后27 d获得耐400 mg/kg莫能菌素的卵囊(4×莫能菌素诱导株)。4×莫能菌素诱导株的ACI为 121，POAA为 25.4%，RLS为33%，POP为 64%。与参考基因组相比，敏感株基因组SNP共12 191个，耐药株基因组SNP共74 931个，耐药株在第11号染色体3.3～4.2 Mb 区间内SNP富集分布，该区间内3个基因ETH2_1113700、ETH2_1113500和ETH2_1113600的SNP位于编码区。【结论】 本研究获得了对莫能菌素完全耐药的柔嫩艾美耳球虫耐药株。在第11号染色体，耐药株与敏感株的SNP分布具有显著差异，筛选到 3个耐药候选基因。

关键词：球虫病;柔嫩艾美耳球虫;莫能菌素;耐药性;SNP密度

基金资助：河北省自然科学基金(C2019405052);河北省重点研发计划项目(19226610D);河北北方学院校级项目(XJ2021009、C2022405015);河北北方学院大学生创新训练项目(S202410092008)