孕酮调控奶牛子宫内膜上皮细胞容受性基因表达的研究

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第11期北京时间：

作者：唐颖, 李琦, 王红战, 李博, 陈艳茹, 郑鹏

单位：东北农业大学动物科学技术学院, 哈尔滨 150030

摘要：【目的】 探讨孕酮对奶牛子宫内膜上皮细胞容受性标志基因表达的影响，为研究孕酮与子宫内膜容受性的关系及其调控机制提供理论依据。【方法】 用0、10、100 μg/L孕酮处理奶牛子宫内膜上皮细胞，通过显微镜观察细胞形态，利用CCK8试验检测细胞增殖水平，使用实时荧光定量PCR检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、血管内皮生长因子(VEGF)和同源盒结构基因10(HOXa10)的mRNA表达水平，筛选孕酮最佳作用浓度。用孕酮、转录激活因子3(STAT3)抑制剂(1.5 μmol/L)、孕酮＋STAT3抑制剂分别处理奶牛子宫内膜上皮细胞，通过实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测VEGF和HOXa10的mRNA和蛋白表达水平。使用Lipofectamine 3000将VEGF的靶向miRNA(miR-497 mimic、miR-497 inhibitor)、HOXa10的靶向miRNA(miR-27a-3p mimic、miR-27a-3p inhibitor)以及阴性对照(mimic-NC、inhibitor-NC)分别转染奶牛子宫内膜上皮细胞，采用实时荧光定量PCR检测细胞中miR-497、miR-27a-3p以及VEGF和HOXa10的表达情况。【结果】 与0 μg/L组相比，10和100 μg/L孕酮处理组细胞增殖水平、PI3K和Akt基因的mRNA表达水平没有显著差异(P＞0.05)，VEGF和HOXa10基因mRNA表达水平显著升高(P＜0.05)，后续选用10 μg/L孕酮进行试验。与10 μg/L孕酮处理组相比，STAT3抑制剂处理组和孕酮＋STAT3抑制剂联合处理组细胞中VEGF和HOXa10的mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P＜0.05)，但与对照组无显著差异(P＞0.05)。与mimic-NC组相比，转染miR-497 mimic、miR-27a-3p mimic后细胞中VEGF、HOXa10的mRNA及蛋白表达水平均显著下降(P＜0.05)；与inhibitor-NC组相比，转染miR-497 inhibitor、miR-27a-3p inhibitor后细胞中VEGF、HOXa10的mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05)。【结论】 孕酮通过激活STAT3信号通路调节奶牛子宫内膜上皮细胞中VEGF和HOXa10基因的表达，miR-497负调控VEGF基因的表达，miR-27a-3p负调控HOXa10基因的表达。

关键词：孕酮;奶牛子宫内膜上皮细胞;容受性基因

基金资助：“十四五”国家重点研发计划课题(2023YFD1300602);黑龙江省现代农业奶牛产业技术协同创新推广体系(230000237613110000244)