佛耳草总黄酮联合抗生素对大鼠慢性阻塞性肺疾病引起的气道炎症的缓解作用

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第12期北京时间：

作者：陈巍, 陈晓兰, 周思杨, 解肖羽婷, 王豪, 杨海峰

单位：1. 江苏农牧科技职业学院, 泰州 225300;2. 常州大学应用技术学院, 常州 213164;3. 泰州学院, 江苏省手性医药化学品生物制造重点实验室, 泰州 225300;4. 中国科学院大连化学物理研究所, 大连 116023

摘要：【目的】 探讨佛耳草总黄酮联合抗生素对肺炎克雷伯菌和脂多糖(LPS)诱发的慢性阻塞性肺疾病(COPD)的治疗效果，并从相关蛋白和基因层面探究其相关抗炎机制，为该疾病的治疗提供一个新的思路。【方法】 将54只Wistar大鼠随机分为6组：对照组、模型组、氨茶碱组、佛耳草总黄酮组、抗生素组、佛耳草总黄酮＋抗生素组，每组9只。除对照组外，其余各组大鼠均采用气管滴注肺炎克雷伯菌和脂多糖的方法建立COPD模型，对照组以等体积的生理盐水代替肺炎克雷伯菌和脂多糖同法处理。COPD造模12周确认成功后，治疗组大鼠每天分别给予氨茶碱(50 mg/kg BW)、佛耳草总黄酮(50 mg/kg BW)灌胃处理，头孢他啶(200 mg/kg BW)肌内注射处理，佛耳草总黄酮＋抗生素组大鼠同时给予佛耳草总黄酮(50 mg/kg BW)和头孢他啶(200 mg/kg BW)处理，对照组和模型组大鼠不做处理。连续治疗7 d后，采用动物肺功能检测仪检测大鼠呼气峰流量(PEF)、吸气峰流量(PIF)、0.3 s用力呼气容积与用力肺活量比值(FEV0.3/FVC)。分别采用HE染色和TUNEL染色检测大鼠肺脏组织病理学形态和组织细胞凋亡水平；采用Western blotting检测大鼠肺脏组织B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)蛋白表达水平；采用实时荧光定量PCR检测大鼠肺脏组织中MMP-2、MMP-9及TIMP-1基因 mRNA表达水平；采用ELISA方法检测各组大鼠血清及肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平；采用流式细胞术检测大鼠肺脏组织Th17、Treg细胞比例。【结果】 与对照组相比，模型组大鼠PEF、PIF、FEV0.3/FVC、Bcl-2、Treg细胞比例均显著降低(P＜0.05)，TUNEL阳性率，Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平，Th17细胞比例、Th17/Treg比值，MMP-2、MMP-9、TIMP-1及IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著增加(P＜0.05)。与模型组相比，氨茶碱组、佛耳草总黄酮组、抗生素组、佛耳草总黄酮＋抗生素组大鼠PEF、PIF、FEV0.3/FVC、Bcl-2、Treg细胞比例均显著增加(P＜0.05)，TUNEL阳性率，Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平，Th17细胞比例、Th17/Treg比值、MMP-2、MMP-9、TIMP-1及IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平均显著降低(P＜0.05)。与佛耳草总黄酮组及抗生素组相比，佛耳草总黄酮＋抗生素组大鼠PEF、PIF、FEV0.3/FVC、Bcl-2、Treg细胞比例均显著增加(P＜0.05)，TUNEL阳性率、Bax、Cleaved Caspase-3、Th17细胞比例、Th17/Treg比值、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、IL-1β、IL-6、TNF-α均显著降低(P＜0.05)。【结论】 佛耳草总黄酮和抗生素联用对减轻COPD大鼠气道炎症损伤具有显著效果，其作用机制与二者抑制细胞凋亡、抑制基质金属蛋白酶(MMPs)和炎症反应、降低Th17/Treg比值有关。

关键词：佛耳草总黄酮;抗生素;慢性阻塞性肺疾病;气道炎症;细胞凋亡;基质金属蛋白酶

基金资助：江苏省高等学校基础科学(自然科学)研究重大项目(24KJA230001)；江苏农牧科技职业学院校级科研揭榜挂帅项目(NSF2024JB01)；泰州市科技支撑计划农业项目(TN202218)；江苏省高校“青蓝工程”资助项目(苏教师函〔2022〕29号)