鸭坦布苏病毒非结构蛋白亚细胞定位及其在IFN-β信号通路中的作用

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第12期北京时间：

作者：张蓉蓉, 潘爱銮, 吴娟, 方兵兵, 汪最, 卢琴, 张腾飞, 温国元, 罗青平

单位：1. 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所, 农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室, 畜禽病原微生物学湖北省重点实验室, 武汉 430064;2. 武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司, 武汉 430074;3. 武汉科前生物股份有限公司, 武汉 430070

摘要：【目的】 探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】 通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因，将其克隆至真核表达载体pCAGGS-HA，构建重组真核表达质粒，并分别转染至HEK-293T细胞，通过Western blotting检测蛋白表达；利用间接免疫荧光试验检测非结构蛋白的亚细胞定位情况，通过双荧光素酶报告试验研究DTMUV的非结构蛋白对鸭源IFN-β启动子活性的影响。【结果】 试验成功构建DTMUV的7个非结构蛋白带HA标签的真核表达质粒。Western blotting结果显示，真核表达非结构蛋白均正常表达，NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5蛋白分子质量大小分别为38、25、14.4、68、13.9、28和100 ku。间接免疫荧光试验结果显示，7个非结构蛋白在细胞内的表达形态不一，主要定位在细胞浆中。双荧光素酶报告试验结果表明，与对照组相比，过表达NS2B和NS4B蛋白后，鸭源IFN-β启动子活性极显著降低(P＜0.01)。【结论】 本研究成功构建了DTMUV的7个非结构蛋白的真核表达质粒，非结构蛋白主要表达于细胞浆中，其中NS2B和NS4B蛋白具有颉颃IFN-β活性的功能。试验结果为DTMUV的免疫逃逸研究提供了一定的理论依据，并为深入探究DTMUV在宿主天然免疫信号通路中的作用机制提供了试验材料。

关键词：鸭坦布苏病毒;非结构蛋白;亚细胞定位;IFN-β信号通路

基金资助：现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-41-G13)；湖北省畜禽优质增效与绿色养殖科技创新行动(2018skjcx05)