基于重组E2蛋白的牛病毒性腹泻病毒间接ELISA抗体检测方法的建立与评价

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第12期北京时间：

作者：张宜宸, 孙明军, 邓昌顺, 丁家波, 徐宝梁, 陈磊, 全春兰, 赵康, 范学政, 秦彤

单位：1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193;2. 中国动物卫生与流行病学中心, 青岛 266033;3. 翔创科技有限公司, 北京 102600;4. 天津嘉立荷牧业集团有限公司, 天津 300450

摘要：【目的】 通过真核系统表达牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2蛋白，以此为包被蛋白建立一种BVDV间接ELISA抗体检测方法，以解决中国BVDV抗体检测技术不足的问题。【方法】 将BVDV E2基因克隆至真核表达载体pTT5，转染293F细胞，待50%细胞死亡后进行超声破碎，并使用Ni离子亲和层析的方法纯化重组E2(rE2)蛋白；以rE2蛋白作为包被抗原，通过对各反应条件进行优化后建立检测BVDV抗体的间接ELISA方法，进行敏感性、特异性、重复性评价，并与中和试验进行比对。用所建方法对不同省份的牛血清样本进行检测。【结果】 采用293F细胞表达了rE2蛋白，经亲和层析方法纯化，rE2蛋白的纯度为99%，浓度为1.74 mg/mL；通过对各个反应条件优化，成功建立了BVDV间接ELISA抗体检测方法。该方法与商品化试剂盒的灵敏度一致，均可检出抗体效价临界血清(VN＝1)；具有良好的特异性，与传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)、牛副流感病毒-3(BPIV-3)、牛呼吸道合胞病毒(BRSV)和牛疱疹病毒-1(BHV-1)抗体阳性血清均无交叉反应；板内和板间重复性试验的变异系数均在5%以内，证明该方法重复性较好；与血清中和试验的符合率为97.5%。临床样本检测结果显示，共检测出364份阳性血清和64份阴性血清。【结论】 基于真核表达的rE2蛋白所建立的BVDV间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性和敏感性，可用于BVDV抗体检测，本研究结果为中国牛病毒性腹泻防控工作提供一种有效的技术手段。

关键词：牛病毒性腹泻病毒(BVDV);E2蛋白;间接ELISA

基金资助：中国农业科学院创新工程项目(ASTIP-IAS15)