布鲁氏菌效应蛋白BspE基因缺失株的构建及其生物学特性研究

来源：中国畜牧兽医杂志2024年第12期北京时间：

作者：张思岚, 支飞杰, 丁剑, 宋银娟, 郑福英, 付强, 储岳峰, 史慧君, 许健

单位：1. 新疆农业大学动物医学学院, 乌鲁木齐 830052;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 兰州大学动物医学与生物安全学院, 动物疫病防控全国重点实验室, 兰州 730000;3. 甘肃省病原生物学基础学科研究中心, 兰州 730046;4. 新疆维吾尔自治区动物疾病预防控制中心, 乌鲁木齐 830000

摘要：【目的】 构建牛种布鲁氏菌(B.abortus)A19株效应蛋白BspE基因缺失株，探究其生长特性及在宿主细胞中的生存、黏附及入侵能力，并观察BspE蛋白的亚细胞定位情况。【方法】 以牛种布鲁氏菌A19为研究对象，运用同源重组及SacB反向筛选技术构建布鲁氏菌效应蛋白BspE基因缺失株A19ΔBspE，并通过质粒回补方法构建其回补株A19CΔBspE，比较3种菌株在体外的生长特性；通过平板计数方法分析BspE基因缺失对布鲁氏菌在细胞内的生存及黏附和入侵细胞能力的影响；通过间接免疫荧光试验检测BspE蛋白在RAW264.7细胞中的定位情况。【结果】 菌液PCR结果显示，获得大小为2 060 bp的特异性条带，成功构建BspE基因缺失株A19ΔBspE；Western blotting结果显示，获得大小约为14.59 ku的BspE-flag条带，成功构建回补株A19CΔBspE。生长曲线结果显示，在相同的培养条件下，A19ΔBspE与牛种布鲁氏菌A19、A19CΔBspE的生长趋势没有显著差异(P＞0.05)，均在8 h达对数生长期，32 h进入平台期。胞内增殖试验结果显示，在感染48 h内，A19ΔBspE在RAW264.7细胞中的生存能力与牛种布鲁氏菌A19、A19CΔBspE无显著差异(P＞0.05)。细菌黏附和入侵试验结果显示，A19ΔBspE黏附和入侵RAW264.7细胞的能力与牛种布鲁氏菌A19、A19CΔBspE没有显著差异(P＞0.05)。间接免疫荧光试验结果显示，BspE蛋白主要分布于核周区域。【结论】 本研究证实了BspE基因的缺失不影响布鲁氏菌在体外的生长及在RAW264.7细胞中的生存、黏附及入侵能力，且 BspE 蛋白主要定位在核周区域，为后续研究布鲁氏菌效应蛋白BspE的生物学功能和致病机制奠定基础。

关键词：布鲁氏菌;效应蛋白BspE;突变株;生物学特性

基金资助：甘肃省自然科学基金重点项目(23JRRA560)；甘肃省联合科研基金重点项目(23JRRA1517)；甘肃省科技重大专项(22ZD6NA001)