彭波半细毛羊冷冻保存睾丸组织支持细胞分离、纯化及鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第1期北京时间：

作者：刘海霞, 王健, 平措班旦, 朱爱文, 德庆卓嘎, 王军, 格桑加措

单位：1. 江苏农牧科技职业学院, 泰州 225300;2. 西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所, 拉萨 850000;3. 江苏现代畜牧科技园, 泰州 225300

摘要：【目的】 睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs)位于生精小管内上皮,为不同分化阶段雄性生殖细胞发育提供物理构架和能量物质支持,对精子发生过程产生至关重要的作用。试验旨在研究新鲜绵羊睾丸组织样品获取不便的情况下,从冷冻保存的彭波半细毛羊睾丸组织分离支持细胞的技术方法。【方法】 将冷冻保存液预处理后冻存的彭波半细毛羊睾丸组织进行复苏,采用苏木精-伊红(HE)染色检测复苏后睾丸组织形态,利用组合酶消化法、差速贴壁法进行睾丸组织支持细胞分离纯化培养,观察细胞生长规律,绘制生长曲线,采用RT-PCR和免疫荧光染色(IF)技术进行睾丸支持细胞特异性基因鉴定。【结果】 冻存复苏睾丸组织曲细精索及睾丸间质保存完好。组合酶消化后能获得满足试验需要的生精上皮细胞混悬液,分离培养2~4 h后支持细胞贴壁,形态呈梭形或不规则多边形,培养3~4 d后汇合,其中培养1~2 d生长速度缓慢,培养3~6 d进入对数期,增殖速度加快,培养7~8 d后增殖速度下降。RT-PCR检测显示,GNDF、WT1、ABP、SOX9基因均在彭波半细毛羊睾丸支持细胞中特异性表达;免疫荧光染色显示,特异性抗体GATA4、Vimentin免疫阳性。【结论】 经冻存液预处理的冷冻保存睾丸组织复苏后,可分离出满足试验条件的原代支持细胞,应用于科学试验研究。

关键词：彭波半细毛羊;冷冻保存;睾丸支持细胞;分离鉴定;细胞培养

基金资助：国家绒毛用羊产业技术体系拉萨半细毛羊试验站(CARS-39-33);西藏自治区羊品种选育与健康养殖专项(XZ202101ZD0001N);江苏现代农业(肉羊)产业技术体系建设专项资金(JATS[2023]353);江苏农牧科技职业学院科研项目(NSF201905)