UPLC-Q-TOF-MS联合网络药理学探讨当归饮子对特应性皮炎小鼠的作用机制

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第2期北京时间：

作者：黄永熙, 闫普普, 郭伟丽, 李亚娜, 朱君, 刘满, 侯超群, 覃美林, 李蓉, 武毅, 苏应兵, 杨小林, 郭利伟, 王雄, 戴刚

单位：1. 长江大学动物科学技术学院, 湿地生态与农业利用教育部工程研究中心, 荆州 434000;2. 河北省沙河市第六中学, 沙河 054100;3. 宜昌人福药业有限责任公司, 宜昌 443000;4. 云南农业大学动物医学院, 昆明 650500;5. 荆州市明德科技有限公司, 荆州 434001

摘要：【目的】 探讨当归饮子(Angelica decoction,DGYZ)治疗2,4-二硝基氯苯(DNCB)诱导的小鼠特应性皮炎(atopic dermatitis，AD)皮肤病变效果，为临床宠物AD的诊断和治疗提供参考。【方法】 选用90只BALB/c小鼠，分为6组：空白组(Control)、DNCB组、DGYZ低(9.8 mg/kg DGYZ)、中(19.6 mg/kg DGYZ)、高(39.3 mg/kg DGYZ)剂量组和西替利嗪组(4 mg/kg西替利嗪)，每组15只小鼠。空白组小鼠涂抹丙酮溶液作为对照，其余各组小鼠通过背部反复涂抹DNCB建立小鼠AD样皮肤病模型，并按分组进行药物治疗。治疗结束后采集小鼠背部皮肤、血液及脾脏用于后续分析。通过HE和甲苯胺蓝染色观察小鼠皮肤组织厚度和肥大细胞数；ELISA方法检测小鼠血清中免疫球蛋白E(IgE)水平；全自动血细胞分析仪测定血液中白细胞(WBC)、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的含量变化；流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+/CD8+和Th1/2细胞分化；实时荧光定量PCR测定小鼠背部皮肤中细胞因子相关mRNA的表达水平；超高压液相色谱-飞行时间质谱仪(UPLC-TOF-MS)分析DGYZ的主要活性成分，联合网络药理学探讨DGYZ治疗AD的主要靶点和作用机制。最后采用实时荧光定量PCR检测JAK1-STAT3信号通路的mRNA表达水平。【结果】 与空白组相比，DNCB组小鼠背部皮肤出现严重的皮肤病变和表皮增厚现象，血液中白细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞数目显著上升(P＜0.05)；与DNCB组相比，DGYZ各剂量组和西替利嗪组小鼠表皮增厚现象均得到有效缓解，血液中白细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞数目均下降，且DGYZ高剂量组及西替利嗪组差异显著(P＜0.05)；DGYZ高剂量组和西替利嗪组小鼠血清中IgE表达水平显著降低(P＜0.05)。流式细胞术结果显示，DNCB组小鼠CD4+/CD8+和Th1/2细胞的平衡受到干扰，不同剂量DGYZ均可显著改善这一情况(P＜0.05)。实时荧光定量PCR检测结果显示，与空白组相比，DNCB组小鼠皮肤组织中γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-12(IL-12)基因mRNA表达水平显著下调(P＜0.05)；IL-4、IL-13、IL-6基因mRNA表达水平显著上调(P＜0.05)。与DNCB组相比，饲喂DGYZ治疗后皮肤组织中IFN-γ和IL-12基因mRNA表达水平逐渐上调，IL-4、IL-13、IL-6基因mRNA表达水平显著下调(P＜0.05)。UPLC-TOF-MS鉴定出89种DGYZ成分，其中活性成分64种。网络药理学分析结果表明，以上64种活性成分通过作用于信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)、蛋白激酶B(AKT1)等基因及JAK/STAT、NF-κB和Th17细胞分化信号通路，对AD样皮肤病变发挥治疗作用。实时荧光定量PCR检测结果表明，DNCB可诱导小鼠JAK1-STAT3信号通路的激活，DGYZ可抑制该途径的激活。【结论】 DGYZ可减少小鼠皮肤中肥大细胞数目和血清中IgE的表达，调节免疫平衡，降低促炎因子的mRNA表达并抑制JAK1-STAT3信号通路激活，缓解AD样皮肤病变。本研究结果可为中药治疗动物AD样皮肤病变提供依据。

关键词：当归饮子(DGYZ);AD样皮肤病变;2,4-二硝基氯苯(DNCB);流式细胞术;网络药理学

基金资助：湿地生态与农业利用教育部工程研究中心开放课题(KFT202306)