影响猪流行性腹泻病毒复制的关键lncRNA筛选及其功能验证

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第2期北京时间：

作者：杨荔, 杜小妹, 刘梦媛, 吴圣龙, 包文斌, 吴正常

单位：扬州大学动物科学与技术学院, 扬州 225009

摘要：【目的】 探究长链非编码RNA(lncRNA)在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)过程中的作用。【方法】 利用感染复数(MOI)为1的PEDV感染IPEC-J2细胞构建细胞病变模型，通过RNA-Seq进行lncRNA测序，筛选出影响PEDV复制的关键lncRNA；利用实时荧光定量PCR和核质分离检测lncRNA表达和细胞定位；构建RNA干扰载体并转染IPEC-J2细胞，通过病毒拷贝数测定、Western blotting、半数组织培养感染剂量(TCID50)以及间接免疫荧光试验(IFA)检测lncRNA表达对PEDV复制水平的影响。【结果】 PEDV感染IPEC-J2细胞24 h时，细胞病变最为明显，成功构建细胞病变模型。与对照组相比，PEDV感染组中存在61个差异表达lncRNA，其中19个上调，42个下调，筛选出1个显著上调且差异倍数较大的lncRNA——lncMSTRG.10733.2。实时荧光定量PCR结果显示，与对照组相比，PEDV感染IPEC-J2细胞后，lncMSTRG.10733.2表达水平显著上调(P＜0.05)。核质分离测定结果显示，lncMSTRG.10733.2主要分布在IPEC-J2细胞质中。成功构建了lncMSTRG.10733.2瞬时干扰IPEC-J2细胞，干扰效率为45.9%。实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示，lncRNA干扰后，PEDV-M基因mRNA相对表达量和PEDV N蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05)。TCID50测定结果显示，lncRNA干扰后PEDV滴度极显著上升(P＜0.01)；IFA结果显示，lncRNA干扰后IPEC-J2细胞中的PEDV N蛋白荧光分布水平明显增加。【结论】 本研究基于高通量测序从细胞水平上筛选鉴定出1个与PEDV感染密切相关的lncRNA，其表达水平上调有利于提高猪对PEDV感染的抵抗能力。研究结果揭示了lncRNA在PEDV感染宿主过程中的重要作用，为今后制定PEDV的抗病育种工作策略和筛选分子标记物奠定基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV);lncRNA;IPEC-J2;病毒复制

基金资助：江苏省研究生科研创新计划(KYCY23_3591);江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(23)3084)；校大学生科创基金(XCX20240786)