非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第2期北京时间：

作者：王小格, 司煊瑛, 闫志伟, 王飞, 尤龙琪, 刘梗, 蔡茂, 梁珺珹, 梁玉秀, 杜永坤, 张改平

单位：1. 河南农业大学动物医学院, 国家动物免疫学国际联合研究中心, 郑州 450046;2. 河南省动物生物制品 工程研究中心, 郑州 450046;3. 陕西省府谷县农业农村局动物疫病预防控制中心, 榆林 719499

摘要：【目的】 采用原核表达系统表达并获得非洲猪瘟病毒(ASFV)p22重组蛋白，并进一步制备、鉴定p22重组蛋白的单克隆抗体。【方法】 采用PCR方法扩增ASFV p22蛋白编码基因，构建重组表达质粒pET-28a(+)-p22，并通过IPTG诱导表达p22蛋白。将纯化后重组蛋白免疫小鼠，取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合制备单克隆抗体。通过Western blotting鉴定单克隆抗体特异性，通过ELISA方法测定腹水效价；利用在线软件预测p22蛋白抗原表位分布情况并合成重叠多肽，通过Dot blotting鉴定抗体识别的抗原表位。【结果】 本研究成功构建了p22重组蛋白的原核表达质粒，获得原核系统表达的p22重组蛋白，分子质量约为22 ku。用纯化后p22蛋白作为免疫原免疫小鼠，成功筛选到4株阳性单克隆杂交瘤细胞株，分别为1G3D7G11、2G5H6H8、6D10G7D6和8F6F8B9，其腹水效价均达到1∶500 000。Western blotting结果显示，4株单克隆抗体均能与p22蛋白发生特异性反应。单克隆亚型鉴定结果显示，1G3D7G11、2G5H6H8和6D10G7D6株单克隆抗体的重链均为IgG1类，8F6F8B9株单克隆抗体的重链为IgG2a类，4株单克隆抗体轻链均为Kappa型。Dot blotting检测结果显示，1G3D7G11、2G5H6H8株单克隆抗体识别抗原表位位于第58—89位氨基酸处；8F6F8B9株单克隆抗体识别抗原表位位于第126—150位氨基酸处。【结论】 本研究成功制备了4株ASFV p22蛋白的单克隆抗体，并初步鉴定了单克隆抗体所识别的B细胞表位区间。研究结果为p22蛋白的生物学功能研究和ASFV血清学检测提供了参考依据。

关键词：非洲猪瘟病毒;p22蛋白;单克隆抗体;抗原表位

基金资助：河南省重大科技专项(221100110600)；河南省自然科学基金面上项目(222300420460)；中国博士后科学基金面上项目(2021M690926)