和田羊KRT79基因克隆、生物信息学分析及雄激素对其在皮肤中表达分布的影响

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第2期北京时间：

作者：冯稚雅, 彭婉婉, 张建萍, 武振辉, 张楠, 李树伟, 史瑞军

单位：塔里木大学生命科学与技术学院, 塔里木盆地生物资源保护利用兵团重点实验室, 阿拉尔 843300

摘要：【目的】 克隆获得和田羊皮肤角蛋白79(keratin 79，KRT79)基因，探究雄激素对和田羊皮肤结构的影响，了解KRT79在雄激素影响和田羊皮肤结构过程中发挥的作用，为深入研究KRT79在绵羊皮肤中的功能及雄激素对KRT79基因表达调控的机制奠定基础。【方法】 选取15只2岁和田母羊，随机分为5组，采用肌内注射的方法对对照组和田羊注射玉米油，对4个试验组和田羊分别注射1、2、3、4 mg/kg BW睾酮，每3天注射一次，共处理42 d，在第42天采集和田羊背部皮肤组织。从对照组和田羊皮肤中提取总RNA，PCR扩增、克隆KRT79基因CDS区序列并测序。利用DNAStar软件对和田羊KRT79基因序列与绵羊等物种相应的基因序列进行比对，采用Mega 5.0软件绘制各物种KRT79基因系统进化树。使用生物信息学在线网站分析KRT79蛋白的理化性质及结构特征。通过HE染色观察睾酮处理的和田羊皮肤结构变化，使用实时荧光定量PCR和Western blotting检测分析不同浓度睾酮处理的和田羊皮肤中KRT79基因和蛋白表达量的差异，并通过免疫荧光染色探究睾酮对KRT79蛋白在和田羊皮肤中表达分布的影响。【结果】 和田羊KRT79基因CDS区序列长1 614 bp，与绵羊的相似性为99.9%。系统进化树分析表明，和田羊KRT79基因与绵羊的进化关系最近，与小鼠的进化关系最远。和田羊KRT79基因编码537个氨基酸，是一种不稳定的亲水性蛋白，KRT79蛋白的二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成。形态学分析结果表明，睾酮处理后和田羊皮肤中皮脂腺面积增大，数量变多。实时荧光定量PCR、Western blotting和免疫荧光结果表明，睾酮处理后和田羊皮肤中KRT79基因和蛋白的表达水平显著高于对照组(P＜0.05)，KRT79蛋白主要分布于和田羊皮肤的皮脂腺、表皮和毛囊区域。【结论】 和田羊KRT79基因CDS区长1 614 bp，是一种不稳定的亲水性蛋白。雄激素刺激能显著促进和田羊皮肤的皮脂腺面积增大和数量变多，并促进皮肤中KRT79基因和蛋白的表达。研究结果为深入探讨雄激素对和田羊皮肤的影响及其作用机制提供了理论依据，同时为解决由雄激素引起的皮肤脂质代谢异常和角蛋白失调疾病治疗方法的研究提供了参考。

关键词：和田羊;KRT79基因')">KRT79基因;皮肤;皮脂腺;雄激素

基金资助：塔里木大学校长基金(TDZKBS202309)；“天池英才”引进计划青年博士项目；天山英才-科技创新领军人才培育项目(2023TSYCLJ0057)