乳源无乳链球菌的分离鉴定、耐药与毒力特征及基因组分析

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第3期北京时间：

作者：高姣姣, 郑楠, 邵伟, 陈贺, 马宪兰, 赵艳坤

单位：1. 新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所, 农业农村部农产品质量安全风险评估实验室(乌鲁木齐), 新疆农产品质量安全实验室, 乌鲁木齐 830091;2. 新疆农业大学动物科学学院, 新疆肉乳用草食动物营养实验室, 乌鲁木齐 830052;3. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 农业农村部奶及奶制品质量安全控制重点实验室, 北京 100193

摘要：【目的】无乳链球菌是引起奶牛乳房炎的主要病原菌之一，明确无乳链球菌的耐药、毒力和基因组特性对无乳链球菌的耐药机制研究具有重要意义。【方法】本研究采用平板划线法将乳样接种于血平板上进行细菌分离纯化，采用形态学观察、革兰染色镜检及分子生物学方法对分离菌进行鉴定。采用微量肉汤稀释法检测分离菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration，MIC)，采用PCR方法检测分离株菌的8种耐药基因和14种毒力基因，利用全基因组测序技术对分离菌进行耐药基因、毒力基因、基因组功能分析。【结果】本研究从36个样本中成功分离出2株菌，在血琼脂平板上表现为白色、圆形、光滑且凸起的菌落，镜检可见紫色球状革兰阳性菌体。生化鉴定结果显示，分离菌呈β-溶血，接触酶试验结果为阴性。2株分离菌16S rDNA PCR扩增均获得大小为1 500 bp的条带，测序结果显示分离菌与无乳链球菌ATCC 13813相似性均＞99.93%，从分子水平上鉴定2株分离菌为无乳链球菌，并将其分别命名为S1、S2。血清型和分子分型结果显示，菌株S1血清型为Ⅱ型，分子分型为ST312；菌株S2血清型为Ⅲ型，分子分型为ST309。药敏试验结果显示，菌株S1和S2对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、苯唑西林、头孢噻呋、磺胺异噁唑和复方新诺明表现出高度敏感性。菌株S1对四环素和克林霉素耐药，而菌株S2则对四环素、红霉素和克林霉素耐药。此外，菌株S2中检测到tetO和ermB耐药基因，其他耐药基因未被发现。在毒力基因方面，菌株S1和S2均检测到了cfb、bca、iagA、bibA、cspA、pavA、sip、hylB和fbsA基因。基因组分析显示，菌株S1具有一条大小为2.44 Mb的环状染色体，GC含量为36.34%，预测含有2 448个基因。菌株S2的环状染色体大小为2.56 Mb，GC含量为36.59%，预测含有2 576个基因。通过构建系统发育树发现，菌株S1与英国无乳链球菌NCTC13947株一致性最高；S2与英国无乳链球菌NCTC8184亲缘性最近。【结论】本研究从36份奶牛乳房炎样本中分离得到2株无乳链球菌S1和S2，对多种抗菌药敏感，但同时也表现出耐药性。基因组分析揭示了其耐药和毒力基因，为进一步研究无乳链球菌的耐药性和毒力提供了数据支持。

关键词：无乳链球菌;耐药基因;毒力因子;基因组

基金资助：国家自然科学基金项目(32060797);自治区天山英才项目(2023TSYCCX0034);自治区重大科技专项资助项目(2022A02006-3-2)