青海海北地区牦牛病毒性腹泻病毒流行病学调查及5'-UTR遗传进化分析

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第3期北京时间：

作者：林伟山, 马豆豆, 雷萌桐, 魏斌, 李国才, 王光华, 王戈平, 简莹娜, 李秀萍

单位：1. 青海大学畜牧兽医科学院, 西宁 810016;2. 青海省动物疾病病原诊断与绿色防控技术研究重点实验室, 西宁 810016;3. 青海省西宁市湟源县畜牧兽医站, 西宁 812100

摘要：【目的】了解青海省海北地区牦牛群中牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况及遗传学分子特征。【方法】对采集自青海海北地区的148份腹泻牦牛粪便样品提取病毒RNA并反转录合成cDNA，以其为模板扩增BVDV 5'-UTR保守区域，建立特异性检测牦牛BVDV的实时荧光定量PCR方法，并以该方法对青海海北地区牦牛养殖场BVDV感染情况进行检测。选取4份BVDV阳性样品，对BVDV 5'-UTR区域序列进行PCR扩增和测序，与NCBI中不同亚型BVDV以及同属病毒毒株进行相似性比对，并基于BVDV 5'-UTR区域进行遗传进化分析。【结果】本研究基于BVDV 5'-UTR成功建立实时荧光定量PCR检测方法，标准曲线相关系数(R2)为0.997，标准品浓度为2.69×102～2.69×109拷贝/μL时具有良好的线性关系，最小检出限为2.69×102拷贝/μL。重复性试验结果显示，变异系数均＜1.7％，具有良好的重复性和稳定性。采用建立的实时荧光定量PCR方法对青海省海北地区门源县、祁连县、海晏县和湟源县的腹泻牦牛粪便样品进行检测，结果显示，BVDV阳性率分别为45.00%、36.00%、30.77%和29.00%。BVDV 5'-UTR序列比对结果显示，分离获得的4株牦牛源BVDV与伊朗、美国的BVDV-1a亚型毒株聚集在同一个独立分支，核苷酸序列相似性为76.6%～99.7%。【结论】本研究明确了BVDV-1a型是导致青海省海北地区牦牛腹泻的重要病原之一，为该地区牦牛养殖场及时、有效地采取防控措施提供了科学依据，同时丰富了当地BVDV的分子流行病学调查数据，为该地区牛病毒性腹泻病的防控及疫苗研发提供了理论基础。

关键词：牦牛;牛病毒性腹泻病毒(BVDV);流行病学;实时荧光定量PCR;遗传进化分析

基金资助：青海大学青年科研基金项目(2021-QNY-5);国家重点研发计划项目(2022YFD1602312)