miR-144-5p在不同体型双峰驼血浆外泌体中的表达及靶基因验证

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第3期北京时间：

作者：斯日古楞, 于雯, 降晓薇, 李子怡, 金君健, 白浩宇

单位：1. 内蒙古农业大学兽医学院, 呼和浩特 010011;2. 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室, 呼和浩特 010011

摘要：【目的】探讨双峰驼血浆外泌体中miR-144-5p在脂质代谢中的潜在调控机制。【方法】采用超速离心法分离不同肥瘦程度的两组双峰驼血浆外泌体后，运用透射电子显微镜和纳米颗粒跟踪分析技术对分离的外泌体进行形态学观察与鉴定。提取外泌体总RNA后，进行高通量测序，鉴定筛选出在两组双峰驼血浆外泌体中差异表达的miRNA。应用TargetScan和miRWalk在线软件预测差异表达miRNA的靶基因，并利用DAVID和KEGG在线分析系统对靶基因进行GO功能和KEGG通路富集分析。构建含靶位点的野生型载体和突变型表达质粒载体，通过miR-144-5p与293T细胞共转染进行双荧光素酶相对活性检测，验证miR-144-5p与其候选基因的作用关系，探讨其在脂质代谢调控中的作用机制。【结果】双峰驼血浆外泌体呈杯状或圆形，直径约100 nm，粒径分布范围为30～150 nm；两组双峰驼外泌体间共有40个差异表达miRNAs，miR-144-5p是差异最显著的miRNA (P＜0.01)；miR-144-5p序列在不同物种间高度保守；预测其靶基因是过氧化物酶体增殖受体γ辅激活因子α(PGC-1α)，该基因主要参与胆固醇平衡和脂质磷酸化等过程，富集于甘油酯代谢、胆固醇代谢和动脉粥样硬化等信号通路；miR-144-5p对野生型PGC-1α-3'-UTR载体的荧光素酶相对活性具有极显著抑制作用(P＜0.01)，而在突变型PGC-1α重组质粒组中，转染后48 h时，miR-144-5p的荧光素酶活性与阴性对照组相比无显著差异(P＞0.05)，表明miR-144-5p通过结合PGC-1α基因种子序列来抑制PGC-1α的表达。【结论】本研究揭示了miR-144-5p在不同体型双峰驼血浆外泌体中的表达差异，并证实其通过调控PGC-1α在脂质代谢中发挥重要作用。

关键词：双峰驼;外泌体;miR-144-5p;脂质代谢;靶基因;双荧光素酶报告系统

基金资助：国家自然科学基金资助项目(32160821);内蒙古自治区自然科学基金资助项目(2023MS03021、2024MS03071)