猪瘟病毒E2基因部分表位区重组猪伪狂犬病病毒的构建及生物学特性研究

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第4期北京时间：

作者：王林青, 张刘辉, 陈曦艋, 马世杰, 宋月, 陈红英

单位：1. 郑州师范学院, 分子生物学实验室, 郑州 450044;2. 河南农业大学动物医学院, 郑州 450046

摘要：【目的】猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)和猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)是当前影响生猪产业发展的两种重要病原，目前无高效的药物治疗方法，主要依靠疫苗接种进行预防。本试验旨在构建含有CSFV E2基因部分表位区的重组PRV毒株，并探究其生物学特性，为开发同时预防CSFV和PRV的二联疫苗提供参考。【方法】首先使用基因工程技术将包含CSFV E2蛋白B/C/D/A 4个表位区的一段基因插入pG-EGFP重组质粒的BamHⅠ位点，构建重组质粒pG-E2AD-EGFP；然后将质粒转染已接种PRV三基因缺失毒株rPRV NY-gE-/gI-/TK-的ST细胞，在ST细胞内发生同源重组，利用蚀斑纯化法拯救出带绿色荧光蛋白的重组病毒rPRV-E2AD-EGFP。使用CRISPR/Cas9敲除载体敲除EGFP基因，经蚀斑纯化得到无荧光的重组病毒rPRV-E2AD。利用PCR扩增和Western blotting检测重组病毒rPRV-E2AD的E2基因A-D表位区表达情况。通过半数组织培养感染剂量(TCID50)法检测不同理化性质处理后病毒增殖情况，对重组病毒培养特性、理化特性进行评价。【结果】通过细胞内同源重组和病毒蚀斑纯化，得到了同时表达CSFV E2AD抗原和EGFP的重组病毒rPRV-E2AD-EGFP。通过CRISPR/Cas9技术敲除EGFP基因，得到了无EGFP基因表达的重组病毒rPRV-E2AD。Western blotting检测结果显示，该毒株表达蛋白大小约27 ku，与预期CSFV E2AD抗原大小一致。rPRV-E2AD毒株与亲本株在ST、IPEC-J2、PK-15、Vero细胞中生长特性基本一致，均在感染后12 h引起细胞融合，36 h出现细胞脱落。理化特性检测结果显示，重组毒株与亲本株在相同理化条件处理下，培养特性相似。【结论】本研究成功获得重组病毒rPRV-E2AD，且外源基因不影响亲本株的增殖特性，试验结果为研发重组CSFV E2基因活载体疫苗提供了候选毒株，也为PRV活载体疫苗的开发提供了研究基础。

关键词：猪瘟病毒(CSFV);伪狂犬病病毒(PRV);重组病毒;E2基因')">E2基因

基金资助：河南省高校科技创新人才支持计划(21HASTIT039);河南农业大学拔尖人才项目(30501277)