2株Cluster 3鹅源坦布苏病毒的分离鉴定及其致病性研究

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第4期北京时间：

作者：陈作鑫, 陈宇欣, 潘彦林, 黄允真, 李林林, 董嘉文, 向勇, 徐志宏, 孙敏华, 张俊勤, 黄淑坚, 廖明

单位：1. 广东省农业科学院动物卫生研究所, 农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室, 广东省畜禽疫病 防治研究重点实验室, 广东省动物疫病野外科学观测研究站, 广州 510640;2. 佛山大学生命科学与工程学院, 佛山 528225;3. 仲恺农业工程学院动物科技学院, 广州 510225;4. 华中农业大学动物医学院, 农业微生物学国家重点实验室, 武汉 430070

摘要：【目的】明确Cluster 3鹅源坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)基因组变异情况及其对鹅的致病性，为Cluster 3 TMUV的防控提供参考。【方法】利用BHK-21细胞对感染TMUV的鹅肝脏组织样品进行病毒分离，通过RT-PCR、间接免疫荧光试验(IFA)、透射电镜观察进行鉴定，并测定分离株的生长曲线。对分离株完成全基因组扩增后，使用ModelFinder、MrBayes等软件对其进行遗传进化分析，并对分离株的E蛋白进行氨基酸突变位点分析；测定分离株病毒滴度后，攻毒30日龄鹅，观察鹅各组织器官临床剖检病变及组织病理变化，使用实时荧光定量PCR检测鹅各组织脏器中的病毒载量。【结果】RT-PCR成功鉴定得到2份TMUV核酸阳性病料，接种至BHK-21细胞后，60 h即可观察到明显病变。将3代病毒液IFA检测可观察到明显红色荧光，透射电镜可观察到直径约50 nm、有囊膜的病毒粒子。从发病鹅肝脏组织成功分离得到2株TMUV，分别命名为JM3与JM1205。病毒一步生长曲线结果显示，JM3和JM1205株分别在培养60和48 h时病毒滴度最高。全基因扩增结果显示，JM3和JM1205株基因组全长均为10 994 bp。遗传进化树显示，JM3和JM1205株均为Cluster 3 TMUV成员，与Cluster 3 TMUV鸡源分离株CTLN遗传距离最近。氨基酸突变位点分析结果显示，与GenBank中最早上传的TMUV毒株MM1775株相比，JM3和JM1205株的E蛋白存在多个氨基酸位点突变，其中V157A突变可能与TMUV毒力增强相关。攻毒后1 d后鹅开始出现排绿色稀粪症状，攻毒后7 d开始出现神经症状。JM3组在攻毒后14 d仍持续排毒，JM1205组排毒持续至攻毒后11 d。攻毒后6 d，鹅出现体重增长减缓、下降的情况，至10 d开始恢复缓慢上升。剖检发现攻毒组鹅出现不同程度的脾脏肿大、胰脏坏死、肝脏发白、大脑充血；此外JM3株攻毒组鹅出现卵巢出血、心包积液；JM1205株攻毒组鹅出现心脏出血。攻毒后各时间点脾脏病毒载量均最高，在攻毒后3 d达到峰值，随后逐渐下降。【结论】本研究自广东地区养鹅场分离得到2株Cluster 3 TMUV：JM3和JM1205，2株分离株均对鹅有致病性，可在鹅体内多个器官复制，引起鹅共济失调、体重下降等症状。

关键词：坦布苏病毒(TMUV);分支3;分离鉴定;鹅;致病性

基金资助：国家自然科学基金(32102691);广东省自然科学基金(2024A1515012732);广州市科技计划项目(2024A04J6754);广东省畜禽疫病防治研究重点实验室项目(2023B1212060040);广东省动物疫病野外科学观测研究站项目(2021B1212050021)